Замена дхо лада гранта: Замена ламп ДХО на Lada Granta » Лада.Онлайн

Содержание

Как заменить лампочку ходовых огней на Лада Гранта

Стандартная комплектация Лада Гранта предполагает установку наиболее примитивных ламп ходовых огней. И единственным их преимуществом стоит считать скромную цену.

Видео замены на 16-ти клапанном моторе ниже.

Стоит ли менять исправную лампу ходовых огней?

А вот недостатков у подобных ламп, хоть отбавляй!

Включая тусклый свет с желтизной, которая не лучшим образом сказывается на видимости впереди машины.
Пример с жёлтыми ДХО
И, конечно же, важно помнить о длительности эксплуатации таких ламп, которая окажется очень недолгой.

Всё это заставляет людей менять в своих автомобилях лампы ходовых огней, практически сразу после покупки.

Диодная лампа ДХО практичнее и ярче

В принципе, замена может касаться и новых ламп накаливания, если старые вышли из строя. Но, ничто не мешает вам использовать светодиодные лампы. Обратите внимание лишь на цоколь, который должен соответствовать тому разъёму, который предполагается в автомобиле.

Но, в таком случае, нужно помнить и то, что одной лишь замены лампы накаливания или галогенной лампы будет недостаточно, так как вам необходимо оторвать цоколь с диода, чтобы выполнить перенаправление усиков к нужным разъёмам. Естественно, что перед процедурой нужно будет проверить правильность полярности.

Обзор стандартной лампы ДХО

Так выглядит стандартная лампа

Стандартная же лампа носит название W21/5W.

При её включении, запускается нить на 21 Вт, а при включении фар, данные огни гаснут, и начинает работать габаритный свет на базе нити в 5 Вт.

Процесс замены ламп ДХО

Необходимо снять (отвести в сторону) корпус воздушного фильтра

Чтобы получить нужный доступ к левому блоку фар, нужно сдвинуть в сторону корпус, внутри которого размещается воздушный фильтр мотора. С этой целью проводим демонтаж всех креплений корпуса, жгутов проводов и датчика. После этого можно будет сдвинуть корпус фильтра вверх.
А вот для получения доступа к правому блоку фар, нужно будет снять крышку силового агрегата. Чтобы это сделать, нужно открутить крышку маслозаливной горловины, а далее аккуратно отщелкнуть крышку. Делается это уверенным движением по направлению вверх. Главное, не забыть завернуть крышку на своё посадочное место обратно, дабы исключить возможность падения в горловину твердых предметов, включая и грязь, которой под капотом может быть достаточно много.

Что же касается разъёма лампы габаритов, то он располагается ближе к нижнему углу фару. Так что, вам потребуется извлечь патрон. Делается это посредством поворота патрона против часовой стрелки. Теперь вам будет доступна лампа, заменить которую очень просто.

Установка новой лампы происходит в обратной последовательности. Главное, попасть патроном в соответствующий паз на фаре, но провернуть уже по часовой стрелке.

Недостатки светодиодных ламп

Ещё один пример диодной лампы дневного света

Если вы решились установить светодиодные лампы, то будьте готовы к некоторым проблемам с их работой.

В основном, речь идёт о том, что датчик на панели приборов будет постоянно сигнализировать о проблемах в работе. Причина этого заключается в пониженном потреблении электричества такими лампами. Это замечает реле контроля, которое постоянно следит за нормальной работой ламп. Так что, увидев пониженную подачу тока, водителю будет показано соответствующее сообщение, что лампа пришла в негодность.

Индикатор будет постоянно гореть на панели приборов, или же сработает звуковая сигнализация бортовой системы. Впрочем, звуковой сигнал будет слышен только в ситуации, если панель приборов будет заменена аналогичной, но европейского варианта.

Ярко, но не по закону! Гибдд будет против!

Кроме того, если вы замените желтый светодиод без соблюдения цветности на белый, то он может дополнительно включать различные оттенки, начиная от синего, и заканчивая фиолетовым. Это может вызвать естественную реакцию со стороны представителей власти. Так что, вам может быть очень сложно доказать, что светодиоды отвечают законодательным нормам, а также правилам безопасности.

Требования к установке

Ключевым недостатком дневных ходовых огней является то, что они не зафиксированы в законодательстве в качестве стандартного осветительного прибора. Так что, может возникнуть немало конфликтов между владельцами транспортных средств и представителями власти.

Специальные виды осветительных приборов должны производиться в точном соответствии государственным стандартам. Поэтому, если была проведена самостоятельная замена, то новые лампы, по своим техническим характеристикам, должны соответствовать выдвигаемым нормам.

К примеру, для автомобиля Лада Гранта ходовые огни дневного типа должны находиться в передней части на высоте не меньше двадцати пяти сантиметров от уровня земли.

Советы

Если вы заметили, что у Вас слишком часто перегорают лампы ходовых огней, то причина может быть в ошибках при замене. Дело в том, что дотрагиваться до колб ламп галогенного происхождения нельзя голыми руками. Работать лучше всего в новых хлопчатобумажных перчатках без грязи и прочих дефектов. Дело в том, что жирные следы, которые будут оставаться на колбе лампы, смогут сократить общий срок службы вплоть до нескольких раз.

А, чтобы удалить загрязнения, нужно просто протереть колбу салфеткой, предварительно смоченной в спиртовом растворе.

И, конечно же, не забывайте о том, что после замены ламп вам может потребоваться провести регулировку фар.

Лампы ДХО Лада Гранта: замена, какие лучше

Лампа ходовых огней появилась в арсенале современных автомобилей сравнительно недавно. В техническом руководстве отечественной модели Лада Гранта четко обозначено, что роль дневных ходовых огней (ДХО) возложена на габаритную оптику, конструкция которой является двух-нитевой. Во время включения зажигания сначала загорается нить, отвечающая за работу ДХО, а с активацией фар происходит одновременное включение габаритного освещения. Мощность первой из обозначенных нитей составляет 21 Вт, а второй – 5 Вт.

Для ходового освещения производитель применяет обыкновенные лампы ДХО. Самым неоспоримым преимуществом таких приборов является их низкая стоимость, а вот «минусов» более, чем достаточно. Об этом свидетельствуют рекламации покупателей, где отражено недовольство тусклым световым пучком желтоватого оттенка и низким показателем ресурса осветительного устройства. Многих владельцев машины интересует вопрос: как поменять лампочку ходовых огней.

Такая расстановка фактов заставляет владельцев Лада Гранта «бросаться» на поиски аналогов ДХО и заменять при первой возникшей возможности. В роли таковых приборов подойдут светодиодные лампы ДХО без цоколей или обычные устройства, но с повышенной светоотдачей и более приятным цветовым спектром излучения. В ассортименте любого специализированного магазина таких ламп предостаточно. Если владельцу по душе светодиодная техника, то специалисты советуют брать к учету параметр их яркости. Что делать, когда необходима замена лампы ходовых огней.

О лампах с повышенным визуальным комфортом

Для Лада Гранта такая лампа ходовых огней являюется обычными осветительными приборами, выполненными по стандартной галогенной технологии, но имеющие более приятный белый световой спектр. В виде главного их недостатка фигурирует снижение видимости при дождливой погоде. Это объясняется склонностью белого света давать больше бликов от намокших поверхностей и дождевых капель в сравнении с желтым оттенком.

Если конкретизировать данный момент, то в числе наиболее распространенных галогенных продуктов, которые охотно приобретаются многими владельцами, можно увидеть следующие:

«OSRAM» и «General Electric»;
«Маяк» и «Philips»;
«Narva», «IPF» и «Hella».

Это еще не весь рекомендованный перечень приборов. Если поинтересоваться приоритетами производителя авто, то ему симпатизируют «OSRAM h5». Эти устройства имеют два варианта исполнения:

«Standard»;
«Light Day».

Первая версия обладает полным соответствием регламентам законодательного характера в плане обеспечения безопасных условий применения, в числе которых: сила тока, светотеневая граница, освещенность, геометрия подачи пучка и мощность.

Второй вариант имеет выгодное отличие от первого в плане повышенного ресурса, однако уступает в мощности светового пучка. Однако, приобрести приборы это одно, необходимо знать, как поменять лампочку ходовых огней своими руками.

Если требуется замена ламп, то ее осуществляют следующим простым методом.

Отвечаем на вопрос, как поменять лампочку ходовых огней своими силами.

Обеспечиваем комфортный доступ к осветительному устройству левой (по ходу) стороны. С этой целью извлекаем корпус фильтрующего компонента воздушного впускного тракта с отсоединением датчика, его подводящих кабелей и патрубков.
Сам корпус подвергаем принудительному смещению вверх и налево.
Для обеспечения доступа к фаре правого бока авто требуется снятие декоративной крышки мотора. Здесь временно откручиваем масло-заливную пробку, затем отвинчиваем 4 крепежных узла и тянем крышку (отщелкиваем).
Извлечение отработавшей лампы ДХО предполагает предварительный поворот патрона против часовой стрелки, после чего его извлекаем из посадочного гнезда. Вынув старую лампу, монтируем новый элемент в патронный паз. Теперь закручиваем сам патрон в блок.

Внимание! Смена галогенных устройств не «терпит» касания пальцами к поверхности их колб.

Это связано с риском оставления отпечатков от потожировых выделений, что негативно сказывается на ресурсе прибора. Рекомендуем в работе пользоваться хлопчатобумажными перчатками, не имеющими резинового напыления на рабочих зонах. Перед монтажом ламп на LADA Granta их колбы протирайте спиртосодержащими салфетками. Именно так и происходит замена лампы ходовых огней.

Коврик в багажник Лада Гранта лифтбек
Сравнение Веста и Гранта сравнение

Диодные ходовые огни

Обозначенный процесс замены ламп на Лада Гранта не предполагает обладания владельцем сверх — способностей, однако сопряжен с некоторыми незначительными нюансами.

Замена лампы ходовых огней на светодиодные аналоги предполагает свое выполнение одновременно в обеих фарах.
При монтаже светодиодных устройств требуется обязательное соблюдение полярности их подключения.

Внимание! Если не учесть необходимость обеспечения полярности, то это приводит к мгновенному выходу из строя самого осветительного устройства. Кроме того, в зону риска попадает предохранитель, защищающий цепь ДХО.

К проверке полярности огней на LADA Granta следует привлекать тестер с включенным в нем режимом вольтметра. Перед извлечением отработанных ламп включаем ДХО. Когда контакты приемников получают напряжение, к их поверхности подносим щупы вольтметра (красный с черным). Смотрим на показания и, если обнаруживаем отрицательное значение, то это свидетельствует о нарушении порядка (полярности) подключения. Цифровой тестер в таком случае выводит на экран «минус», а аналоговый – «загоняет» стрелку ниже «нуля».

Особенности монтажа светодиодных ДХО

Если не удалось отыскать устройства для Лада Гранта без цоколей, то можно остановиться на применении обычных изделий. Здесь понадобится собственноручное удаление цоколя, а его освободившиеся контакты требуется подгонять под монтажные отверстия.

После завершения процедуры замененные приборы не следует выбрасывать. Это объясняется потребностью соблюдения регламента, регулирующего нормативно-технические требования к аспектам дневного освещения, что предполагает посещение тех-центра. Если этим пренебречь, то возможен риск запрещения эксплуатации автомобиля с доработанной таким образом светотехникой при очередном техосмотре.

Сегодня рыночная сеть способна предложить массу светодиодных устройств для LADA Granta, обладающих разным спектром освещения. Однако регламентные нормы говорят о допустимости только белого или желтого оттенка для ДХО, а остальные альтернативы запрещены.

Приборы на светодиодной технологии, в том числе и лампы ДХО отличаются от галогенных сравнительно меньшим потреблением энергии. Это позволит в дальнейшем снизить уровень нагрузки на АКБ. Забыв однажды деактивировать ДХО на ночь, вы все равно минимизируете риск разрядки аккумулятора.

Конструктивное устройство системы освещения Лада Гранта предполагает присутствие в схеме реле, несущего ответственность за обеспечение функционала ДХО. Кроме этого, данное устройство обеспечивает подачу питания к стоп-сигналам и инжектору. Ввиду сниженного энергопотребления светодиодных устройств на авто LADA Granta, реле способно генерировать некорректные показания, сетуя на неисправность ДХО. При такой картине лампа ходовых огней на «приборке» будет активироваться с надоедливой частотой, а встроенный диагностический комплекс издавать звуковые сигналы. Чтобы ликвидировать проблему, потребуется замена стандартной панели на экспортный аналог, устанавливаемый в европейские версии Лада Гранта. А как поменять лампочку ходовых огней мы описали выше.

Как поменять лампу дхо на гранте

На Лада Гранта лифтбек и седан габариты совмещены с дневными ходовыми огнями в одной лампе. Лампа так и называется: габаритного/дневного ходового огня двухнитевая (на новом и старом семействе она одинаковая – W21/5W). При включении зажигания автоматически включаются ДХО (нить 21 Вт), а при включении фар ДХО гаснут, и включается габаритный свет (нить 5 Вт). Далее расскажем про особенности замены лампочки ДХО Лада Гранта..

Чтобы получить доступ к левой блок фаре необходимо сдвинуть в сторону корпус воздушного фильтра двигателя. Для этого освобождаем все крепления корпуса, жгут проводов и датчик. После чего сдвигаем корпус фильтра вверх, как показано на фото:

Чтобы получить доступ к правой блок фаре следует снять крышку двигателя. Для этого потребуется открутить крышку маслозаливной горловины, а затем отщелкнуть крышку, потянув ее вверх. Не забудьте обратно завернуть крышку, чтобы исключить попадание в горловину посторонних предметов!

Разъем ламп габаритов в Лада Гранта находится на месте №7. Чтобы заменить лампу ДХО нужно извлечь патрон, повернув его против часовой стрелки, а затем вытянуть лампу. Установить новую лампу в обратной последовательности, патроном попасть в паз на блок фаре и повернуть по часовой стрелке.

Весь процесс замены ламп ДХО показан на видео:

Почему на Лада Гранта часто перегорают лампочки ДХО? Причина в ошибке при замене. Нельзя дотрагиваться до колб галогенных ламп пальцами. Работайте в чистых хлопчатобумажных перчатках без резинового напыления. Жирные следы от пальцев, оставшиеся на колбе лампы, в несколько раз сократят срок ее службы. Чтобы удалить загрязнения, протрите колбу чистой салфеткой, смоченной спиртом.

Напомним, периодически проверяйте головное освещение и в случае необходимости отрегулируйте фары.

О лампах с повышенным визуальным комфортом

«OSRAM» и «General Electric»;
«Маяк» и «Philips»;
«Narva», «IPF» и «Hella».

Если требуется замена ламп, то ее осуществляют следующим простым методом.

Отвечаем на вопрос, как поменять лампочку ходовых огней своими силами.

Обеспечиваем комфортный доступ к осветительному устройству левой (по ходу) стороны. С этой целью извлекаем корпус фильтрующего компонента воздушного впускного тракта с отсоединением датчика, его подводящих кабелей и патрубков.
Сам корпус подвергаем принудительному смещению вверх и налево.
Для обеспечения доступа к фаре правого бока авто требуется снятие декоративной крышки мотора. Здесь временно откручиваем масло-заливную пробку, затем отвинчиваем 4 крепежных узла и тянем крышку (отщелкиваем).
Извлечение отработавшей лампы ДХО предполагает предварительный поворот патрона против часовой стрелки, после чего его извлекаем из посадочного гнезда. Вынув старую лампу, монтируем новый элемент в патронный паз. Теперь закручиваем сам патрон в блок.

Внимание! Смена галогенных устройств не «терпит» касания пальцами к поверхности их колб.

Диодные ходовые огни

Замена лампы ходовых огней на светодиодные аналоги предполагает свое выполнение одновременно в обеих фарах.
При монтаже светодиодных устройств требуется обязательное соблюдение полярности их подключения.

Внимание! Если не учесть необходимость обеспечения полярности, то это приводит к мгновенному выходу из строя самого осветительного устройства. Кроме того, в зону риска попадает предохранитель, защищающий цепь ДХО.

Особенности монтажа светодиодных ДХО

Здравствуйте дорогие подписчики!

Сегодня я заснял видео о том как заменить лампочки габаритных огней на Лада Гранта,
Они же кстати и Дневные Ходовые огни! ( В магазинах когда искал лампочку, все чуть с ума не сошли… когда я им говорил: » Здравствуйте, у Вас есть светодиодные лампочки, на дневные ходовые огни на Ладу Гранту?»
Не мне приносили лампочки разные, даже до смеха доходило… какие только не несли:)))))
Но дело в том что если продавцу сказать, что тебе лампочки нужны в дневные ходовые огни (ДХО) то они долго не смогут поверить что на Грантах они просто на просто есть! :))
Нужно говорить: «Здравствуйте, дайте мне пожалуйста светодиодные лампочки в ГАБАРИТЫ на Ладу Гранту! )
И так ближе к делу…
Вот видео как они меняются!
Даже триногу для фотика сегодня купил, что бы видео получилось не с дрожащих рук, а по нормальному :)) а вот и тренога …

Так что это видео действительно очень продуманно с моей стороны, много делал попыток снимать самому, просил любимую Племяшку Настюшку, но тринога спасла положение и вот что получилось!

Замена дхо на гранте

Здравствуйте дорогие подписчики!

Решил я вставить свои 5 копеек в эту тему ибо в инете полно видео и фото с заменой на 8-клапанном моторе, а с 16-клапанным ничего путного либо нет совсем, либо есть, но не так подробно и понятно, как хотелось бы.

И так начнем:
Нам нужны либо лампы W21/5W. Такие лампы идут в стоке. Я покупал фирмы Philips, говорят они долго держатся (не проверено, не факт). Многие ставят вообще светодиоды, белых и синих оттенков, но мне кажется это лишнее. Мои лампы и так яркие, даже при дневном освещении:

Далее, начинаем с правой лампы (по ходу движения автомобиля). Что бы ее заменить, надо открутить бачок с жидкостью омывания стекол. Можно его не снимать полностью. У меня, не сказать, что бы прямо маленькие или тоненькие руки или какие то сверх гибкие. Руки обычные, мужские. Однако полностью бачок я не снимал, жидкость не сливал. Я его открутил, вытащил моторчик и задрал бачок максимально высоко, что бы рука пролезла к лампочке. Далее делал на ощупь, руководствуясь видео (ниже по тексту), для замены на 8-клапанном движке.

К сожалению ни фото ни видео не делал. Правую сторону еще осенью 2017 года. По этому единственное что могу тут — просто подсказать. Там сильных проблем у вас возникнуть не должно, просто открываете капот, лезете к лампе, убираете все, что на пути мешается и сами разберетесь попутно. Однако лично я, пока разбирался, случайно зацепил и выдернул гидрокорректор фар. Заметил позже, когда фары стали светить в землю. Правда это не страшно, поломок не произошло. Гидрокорректор просто был поставлен на свое место руками. Без откручивания бачка с омывайкой. Тем не менее, я такую ошибку допустил. Не допустите вы.

Далее идем к левой лампе ДХО и тут уже начинается веселенькое.
Я сразу сошлюсь на видео, которое выступило для меня как бы главным руководством к действию:

Однако у него, в его случае 8-клапанный мотор. Судя по комментам, там можно было не откручивать шланг антифриза и не снимать короб воздушного фильтра. У нас же подкапотное в этом месте выглядит так:

Весь процесс замены ламп ДХО показан на видео:

Напомним, периодически проверяйте головное освещение и в случае необходимости отрегулируйте фары.

Дхо лада гранта замена

Замена ламп ДХО Лада Гранта: как все сделать правильно

Лампа ДХО Лада Гранта — это осветительный прибор для дневных ходовых огней. В автомобилях этой марки функцию таких огней выполняют лампы габаритов. В технической литературе они так и называются: двухнитевые лампы габаритного и дневного ходового огня (ДХО). При включении зажигания загорается 21-ваттная нить ходовых огней, а при включении фар — 5-ваттная нить габаритов.

Изготовитель комплектует Ладу Гранта самыми простыми и недорогими лампами ДХО. Недостатков у них много, а преимущество только одно — низкая цена. Одними из главных покупательских рекламаций на эти лампы являются тусклый желтоватый свет и очень низкий ресурс при эксплуатации.

Автолюбители, не желающие мириться с недостатками стандартных дневных ходовых огней, заменяют их другими моделями при первой же возможности. В качестве источников света подходят светодиодные лампы без цокольной сборки или лампы повышенного визуального комфорта. Ассортимент таких ламп достаточно широк, найти их можно практически в любом магазине автозапчастей. При выборе источников светодиодного освещения специалисты рекомендуют руководствоваться параметром яркости.

Лампы повышенного визуального комфорта

Лампа ДХО Лада Гранта повышенной комфортности представляет собой обыкновенные галогенные лампы накаливания ближнего света, светящие белым. Основным недостатком является ухудшенная видимость в дождливую погоду из-за того, что белый свет дает намного больше бликов от мокрых поверхностей и капель дождя, чем желтый.

В продаже чаще встречаются следующие марки галогенных лам высокого комфорта: OSRAM, General Electric, Маяк, Philips, Narva, IPF, Hella и др. Производитель рекомендует выбирать модели OSRAM h5 в модификациях Standard и Light Day. Первая полностью соответствует всем нормам и требованиям законодательства по безопасности, освещенности, геометрии и точности светотеневой границы. Имеет самое высокое значение силы света. Вторая модель отличается от первой значительно более высоким сроком службы. По силе света немного уступает модификации Standard.

Замена ламп ближнего света осуществляется так. Освободите доступ к левой блок-фаре. Для этого освободите корпус воздушного фильтра Лады от всех креплений, отсоедините жгут проводов и датчик. Затем сдвиньте корпус фильтра вверх и влево. Чтобы получить доступ к правой блок-фаре, необходимо снять крышку силового агрегата. Для этого отвинтите крышку маслозаливной горловины, а затем 4 крепежных болта. После этого потяните крышку вверх и отщелкните ее.

Чтобы извлечь старую лампу, сначала поверните патрон против часовой стрелки, после чего аккуратно вытягивайте источник света. Новую устанавливайте в обратном порядке: сначала установите цоколь в паз патрона, затем закрутите патрон по часовой стрелке.

Обратите внимание: при замене галогенных ламп не рекомендуется касаться колб пальцами.

Дело в том, что потожировые следы от пальцев на колбах световых приборов многократно сокращают их ресурс. Поэтому работать необходимо в чистых хлопчатобумажных перчатках без напыления из резины. Сами колбы перед установкой протрите спиртовыми салфетками.

Дневные ходовые огни на основе диодов

Замена ламп накаливания и установка светодиодов на автомобиле Лада Гранта не требует особых навыков, но имеет некоторые нюансы. Во-первых, лампы в обеих фарах должны заменяться одновременно: если меняете одну лампу накаливания на светодиодную, то другую тоже обязательно смените. Во-вторых, замена ламп на светодиодные источники освещения требует обязательного соблюдения полярности питания.

Обратите внимание: при попытке установки светодиодной лампы без соблюдения полярности она мгновенно выходит из строя. Более того, существует высокая вероятность выхода из строя предохранителя питания ламп ДХО. Поэтому, если все же ваши действия привели к перегоранию прибора, перед новой попыткой обязательно меняйте предохранитель.

Полярность контактов определяется с помощью вольтметра (тестера). После того как старые лампы будут извлечены, необходимо включить дневные ходовые огни, чтобы на контакты подавалось напряжение. Затем красный щуп вольтметра подключаете к одному контакту, черный — к другому. Если прибор покажет положительное напряжение, то красный щуп будет соответствовать «плюсу», а черный — «минусу». Если вольтметр показывает отрицательное постоянное напряжение, значит, провода подключены наоборот: красный — к «минусу», черный — к «плюсу».

При этом цифровой тестер отрицательное напряжение будет выдавать со знаком «минус», а показания стрелочного вольтметра уйдут ниже нуля.

Нюансы установки светодиодных ламп ДХО

Если не нашлось бесцокольных светодиодных ламп для Лада Гранта, можно установить обыкновенные цокольные. При этом придется самостоятельно удалить цоколь с диода, а освободившиеся усики подогнать под установочные отверстия.

После окончания замены ламп не выкидывайте старые галогеновые приборы. Дело в том, что для соблюдения нормативно-технических требований к дневному свету после установки новых ламп нужно будет посетить техцентр. В противном случае очередной плановый техосмотр запретит эксплуатацию авто с такими доработанными фарами.

В продаже имеется множество светодиодных источников света различных цветов и оттенков. Но по нормам испускаемый дневными ходовыми огнями свет должен быть только белым или желтым. Все остальные цвета запрещены.

Светодиодные лампы потребляют значительно меньшее количество электроэнергии, чем стандартные лампы накаливания. Поэтому установка светодиодных огней существенно снизит нагрузку на аккумулятор. Если вы забудете выключить на ночь ходовые огни, к утру аккумулятор почти не разрядится.

Конструкцией автомобиля Лада Гранта предусмотрено реле, контролирующее исправность ДХО. Кроме того, это реле одновременно следит за функционированием инжектора и стоп-сигналов. Учитывая, что светодиодные лампы потребляют меньше энергии, реле контроля может давать ошибочные показания, сигнализируя о том, что ходовые огни неисправны. То есть лампа ДХО на приборной панели будет часто включаться, а бортовая диагностическая система постоянно пищать.

Чтобы избавиться от подобной проблемы, необходимо заменить стандартную приборную панель ее экспортным вариантом, предназначенным для европейских вариантов Лада Гранта.

Page 2

Данная рубрика поможет владельцам автомобилей Лада Гранта подобрать необходимые детали для ремонта авто либо его модернизации. Наши специалисты подскажут, как провести монтаж тех или иных комплектующих. Например, как самостоятельно установить молдинги на машину или поменять фары. Вы узнаете, как правильно выбрать коврики для салона авто или материал для перетяжки сидений. Наши специалисты расскажут о тонкостях выбора и установки багажника на крышу и многих других нюансах, касающихся подбора комплектующих для вашей машины.

Главная

Лада-Гранта, замена штатных ламп ДХО на светодиодные. — DRIVE2

После 2-х лет эксплуатации машины заметил, что колбы ламп ДХО потемнели, решил их сменить и подумал, что будет лучше установить диодные, т.к. светят они получше, энергопотребление поменьше и не такой нифельный, жёлтый свет как у штатных.Стал искать в нете подходящие, но тут оказалось, что на Гранте заводская распайка колодки (

фото №1: заводская колодка и распайка ДХО Гранты.

см.фото 1) подключения не подходит практически ни на одну светодиодную лампу W21/5W, а подходят с маркировкой P21/5W ( см.фото 2)

фото №2: такая распиновка контактов на лампе ДХО Гранты.

, но такие лампы есть только двухцветные.Что делать?Подумал и решил идти по пути наименьшего заморачивания. Приобрёл пару ламп ( см. фото 3)

фото №3: такая распиновка не катит для ДХО Гранты.

,но не стал задействовать контакты для 5W (найти можно, кинув питание от АКБ на прямую, по яркости свечения) просто изолировав их.Теперь ДХО работает с более ярким и приятным свечением, но тут есть один нюанс, когда ночью оставляешь авто с включёнными габаритами и выключенным зажиганием, впереди они (габариты)не горят.Буду думать как решить эту задачу.

ДХО со светодиодами.

так в тёмное время суток светят ДХО

Page 2

После 2-х лет эксплуатации машины заметил, что колбы ламп ДХО потемнели, решил их сменить и подумал, что будет лучше установить диодные, т.к. светят они получше, энергопотребление поменьше и не такой нифельный, жёлтый свет как у штатных. Стал искать в нете подходящие, но тут оказалось, что на Гранте заводская распайка колодки (

фото №1: заводская колодка и распайка ДХО Гранты.

фото №2: такая распиновка контактов на лампе ДХО Гранты.

фото №3: такая распиновка не катит для ДХО Гранты.

ДХО со светодиодами.

так в тёмное время суток светят ДХО

Замена ламп ДХО/Габариты на Led — Лада Гранта Лифтбек, 1.

6 л., 2014 года на DRIVE2

Вслед за лампами в задних фарах, решил приняться за передние. На этот раз меняем лампы ДХО/габариты. тип лампы W21/5W он же T20 7443

наш тип лампы с права

покупал лампы опять на алиэкспресс покупал со скидкой, мне они обошлись в 1350р (раньше вообще можно было купить в 2 раза дешевле((( ).Будьте внимательны эти лампы с неправильным расположением для нас контактами. Приходиться их перегибать. Я один ус вообще отломил( габарит). Так как мне не нужно, что бы машина после запуска, долбила таким светом в квартиры первых этажей.

Вместе с ними купил лампы в подсветку номера

пришли вот в таких пакетиках

лампы T20 7443

проверка ламп1 видео

2 видео

Для того чтобы их заменить приходиться очень сильно постараться. Некоторые пишут, что бы подобраться к правой фаре достаточно снять крышку на двигателе. Как я не старался не смог засунуть руку в эту щель, поэтому снимал бачок омывайки. Снимается он очень легко: скидываешь 4 клеммы и откручиваешь одну единственную гайку.

снял бачек

вот какое огромное пространство получается

сама клемма лампы

вот результат

Но не долго я радовался. Одна из ламп стала мерцать

Сразу после выявленного дефекта написал продавцу. Сошлись с ним на том что он выслал мне новые 2 лампы с правильным расположением контактов, а я оплатил только доставку 140р

По совету DenAon решил разобрать и пропаять все контакты.

Теперь все отлично

Делать сравнительный анализ ламп которые приедут?

замена заводских ДХО на светодиодные( временная) — Лада Гранта Лифтбек, 1.6 л., 2016 года на DRIVE2

вот и первая неисправность…

погас правый заводской ДХО. причём погас не из-за лампы, а из-за плохой обжимки разъёма провода в клеммной колодке. просто заводской брак. от этого никто не застрахован…вообще то я нахожусь сейчас в процессе создания специальных ДХО на гранту, с функцией помощи дальнему свету… И ну никак не хотел никак ставить что либо. однако уж если работать с проводкой пришлось всё равно( что чинить родное разбирая разъём, что менять на альтернативу) я пока поставил эти как временные.

ранее эти модули стояли у меня на авео. изготовил и продал их мне Сергей SergeySSK вот ссылка на его магазинна драйв2. при продаже машины я их демонтировал и положил на полочку. сегодня дождь целый день… отличный повод поработать на улице с проводкой машины =)монтаж прост — отрезал родные ДХО и подключил три провода с проводки машины на светодиодные модули

( вообще то они двухцветные, то есть включают в себя ещё и функцию поворота. но мне нужны были только габарит/ДХО. контакты соединил специальными клеммами. покупал их очень давно. уж не помню где… классные, внутри смазкой набиты. вставляешь два провода в отверстия и зажимаешь пассатижами кнопку. всё, соединение готово. причём герметичное.

конкретно такой конфиг модуля вообще то не подходит по геометрии разъёма в фару. я вышел из ситуации следующим образом:так как входит в отверстие фары модуль с натягом, я мазнул клеем для тачскринов

алюминиевую болванку и вставил в фару.

на пару месяцев хватит. клей скорее для перестраховки. ибо вытащить специально можно, но приложив видимые усилия. пока сойдёт, хоть мне и не нравится этот вариант.итог и сравнение на машине привожу на фото.

Полный размер

светодиод и лампа накаливания. режим ДХО

Полный размер

светодиод и лампа накаливания режим габарит

Полный размер

светодиод и лампа накаливания. вид с ближним светом фар

Полный размер

светодиодный габарит с ближним светом

Полный размер

габарит лампа накаливания с ближним светом

Полный размер

фото для истории =)

Полный размер

готовы обе стороны

Полный размер

готовы обе стороны

Полный размер

внешний вид модуля в фаре, когда он выключен.

видео про модули ДХО:рассказчик из меня так себе, да и снимать видео на телефон одной рукой, а второй одновременно подключать очень неудобно…

Цена вопроса: 0 ₽ Пробег: 5154 км

Page 2

вот и первая неисправность…

алюминиевую болванку и вставил в фару.

Полный размер

светодиод и лампа накаливания. режим ДХО

Полный размер

светодиод и лампа накаливания режим габарит

Полный размер

светодиод и лампа накаливания. вид с ближним светом фар

Полный размер

светодиодный габарит с ближним светом

Полный размер

габарит лампа накаливания с ближним светом

Полный размер

фото для истории =)

Полный размер

готовы обе стороны

Полный размер

готовы обе стороны

Полный размер

внешний вид модуля в фаре, когда он выключен.

Цена вопроса: 0 ₽ Пробег: 5154 км

Лампа ДХО Лада Гранта: замена и характеристики

Лампы повышенного визуального комфорта

Обратите внимание: при замене галогенных ламп не рекомендуется касаться колб пальцами.

Дневные ходовые огни на основе диодов

При этом цифровой тестер отрицательное напряжение будет выдавать со знаком «минус», а показания стрелочного вольтметра уйдут ниже нуля.

Нюансы установки светодиодных ламп ДХО

Чтобы избавиться от подобной проблемы, необходимо заменить стандартную приборную панель ее экспортным вариантом, предназначенным для европейских вариантов Лада Гранта.

Лампа ходового огня | Лады Гранты

Автор Константин На чтение 2 мин. Просмотров 22.9k.

Новая система габаритных огней на Лада Гранта позволит водителю не задумываться о покупке ДХО, достаточно повернуть ключ зажигания, и достаточно яркий свет будет обозначать транспортное средство на дороге как нельзя лучше, что является залогом безопасности.

Многие автовладельцы любят повозиться со своим авто, не прибегая к помощи специалистов. Это не только экономит деньги и время, но и позволяет водителю набраться опыта и просто сделать себе приятное — например, самостоятельная замена ДХО Лада Гранта не представляет никакой сложности, особенно после прочтения нашей инструкции:

1. Необходимо повернуть патрон ДХО в блок-фаре против часовой стрелки и аккуратно вынуть патрон вместе лампой.

2. Монтирование и демонтирование необходимо производить в хлопчатобумажных перчатках во избежание загрязнения. Лампа достается вытягиванием из патрона, без прокручиваний и покачиваний.

3. Для левой блок-фары необходимо отодвинуть в сторону корпус фильтрующего элемента, далее проводить те же действия.

4. После замены ламп производим действия в обратном порядке, соблюдая осторожность.

5. Вот и все, замена ходовых огней Лада Гранта больше не представляет никакой сложности!

Как это работает

Новый форм-фактор фары устроен таким образом, что лампа ходовых огней еще выполняет роль габаритов. Тип лампы W21/5W содержит в себе две нити накаливания, основная 21 ватт и дополнительная 5 ватт. Основная спираль как раз-таки и служит как лампа ходовых огней, а вторая выполняет роль габаритов. Поворачиваете зажигание — загорается основная спираль, включаете ближний свет — лампа затемняется и включает дополнительную спираль. Такой способ помогает и обезопасить себя на дороге в светлое время суток, обозначая ТС ярким светом, и бережно относиться к питающей части автомобиля во время движения с включенными фарами.

Чем заменить

Какой освещающий элемент считается наиболее выгодной с точки зрения комфорта? Сейчас широкое распространение получили светодиодные лампы в ходовые огни Лада Гранта. Чистое белое свечение пришлось по вкусу многим автолюбителям. Да и правила дорожного движения не запрещают пока их использование. Существует огромное количество вариантов белого свечения — от иссиня-белого, до теплого желтого.

Светодиодные огни так же хорошо заметны днем, да еще и энергоэффективны.

Что мы получаем в итоге

Самостоятельная замена ламп ходовых огней Лада Гранта теперь не представляется сложным, а ваш автомобиль выглядит еще привлекательнее и соответствует сегодняшним трендам.

Видео по теме

Также читайте: Лампа ближнего света, какая и как заменить.

Государственная субсидия на хороший ремонт — 5337

Программа государственных субсидий на хороший ремонт (49 USC 5337) предоставляет капитальную помощь для проектов по техническому обслуживанию, замене и реабилитации высокоинтенсивных фиксированных направляющих и автобусных систем, чтобы помочь транспортным агентствам поддерживать активы в хорошем состоянии. Кроме того, гранты SGR имеют право на разработку и реализацию планов управления транзитными активами.

Правомочные получатели

Правомочные получатели — это органы государственной власти и местного самоуправления в УЗА с фиксированными направляющими и системами высокоинтенсивных автомобильных автобусов, обслуживающими доходы не менее семи лет.

Допустимые мероприятия

State of Good Repair Grants Средства доступны для капитальных проектов, которые содержат фиксированные путевые пути или систему автобуса высокой интенсивности в состоянии хорошего ремонта, включая проекты по замене и восстановлению:

подвижной состав
трек
линейное оборудование и конструкции
сигналы и связь
энергетическое оборудование и подстанции
пассажирских вокзалов и терминалов
охранное оборудование и системы
ремонтные сооружения и оборудование
оперативно-вспомогательного оборудования, включая компьютерное оборудование и программное обеспечение;

, а также реализовать планы управления транспортными активами.

Нормативные ссылки

49 U.S.C. Раздел 5337 / Закон о FAST Раздел 3015

Доступность финансирования

Фонды доступны для исполнения обязательств на четыре финансовых года. Сюда входит финансовый год, в котором сумма выделяется или выделяется, плюс три дополнительных года.

Распределение финансирования

Распределение средств производится по установленной законом формуле. Средства, выделяемые UZA на высокоинтенсивные системы фиксированных направляющих, основаны на доходных милях и милях маршрута, сообщаемых в Национальную базу данных транзитных перевозок (NTD), и на том, что UZA получило бы в формуле модернизации фиксированных направляющих путей на 2011 финансовый год с использованием текущего определения фиксированных направляющих. .Фонды для высокоинтенсивных автобусов выделяются UZA на основе миль доходов и миль маршрута, сообщаемых NTD.

Матч

Федеральная доля приемлемых капитальных затрат составляет 80 процентов от чистой стоимости капитального проекта, если получатель гранта не запрашивает более низкий процент.

Разрешение на грант: 49 U.S.C. 5337

Министр транспорта США Элейн Л. Чао объявляет о выделении субсидий на «Текущий ремонт» на сумму 291 миллион долларов на повышение надежности и безопасности железнодорожной сети Америки

ВАШИНГТОН — U.Министр транспорта Элейн Л. Чао объявила сегодня об инвестициях в размере более 291 миллиона долларов в виде грантов для 11 проектов междугородных пассажирских железных дорог в девяти штатах в рамках программы партнерства между федеральными и штатами для обеспечения надлежащего ремонта (Программа партнерства).

«Эти 291 миллион долларов в виде федерального гранта позволят модернизировать железнодорожную инфраструктуру и повысить безопасность и надежность железных дорог в сообществах по всей Америке», — заявила министр транспорта США Элейн Л. Чао.

Партнерская программа предназначена для улучшения показателей междугородных пассажирских железнодорожных перевозок путем финансирования капитальных проектов по ремонту, замене или реабилитации железнодорожных активов, находящихся в государственной или контролируемой собственности, с приведением их в надлежащее состояние. Финансирование этих премий составляет 291 422 706 долларов США, из которых 198 миллионов долларов США выделяются в соответствии с Законом о дополнительных консолидированных ассигнованиях 2020 года, а оставшиеся средства в размере 93 422 706 долларов США предоставляются в соответствии с Законом о консолидированных ассигнованиях 2019 года.

Федеральное управление железных дорог (FRA) опубликовало Уведомление о возможности финансирования для этого цикла присуждения контрактов 10 июня 2020 года. В процессе оценки и отбора учитывались несколько факторов при выборе проектов, в том числе способность проекта улучшить обслуживание и безопасность и удовлетворить существующие или ожидаемый спрос.

«Эта администрация инвестировала миллиарды в железнодорожную инфраструктуру, чтобы обеспечить безопасное движение пассажиров и товаров по всей стране», — сказал администратор FRA Рональд Л. Баторий. «Эти инвестиции оказались жизненно важными в течение этого непростого года и обеспечили перемещение основных грузов по всей нашей стране, и эти гранты State of Good Repair продолжат эти улучшения и улучшат пассажирские железнодорожные перевозки, чтобы подготовить страну к предстоящему восстановлению», — добавил Баторий.

Были отобраны следующие 11 проектов.Описания проектов доступны на веб-сайте FRA здесь.

Департамент транспорта США Управление по связям с общественностью 1200 New Jersey Avenue, SE Вашингтон, округ Колумбия 20590 www.transportation.gov/briefingroom Новости

Калифорния — Сан-Диего Сигнализация нового поколения и модернизация подъездных путей
До 9 836 917 долларов
Транзитный округ Северного округа

Калифорния — Восстановление коридора Pacific Surfliner и надежность обслуживания
До 31 800 000 долларов США
Региональное управление железных дорог Южной Калифорнии

Коннектикут — Замена пешеходного моста
До 79 700 000 долларов США
Департамент транспорта Коннектикута

Коннектикут — Замена моста через реку Коннектикут
До 65 200 799 долларов
Amtrak

Массачусетс — Доступность и улучшение инфраструктуры станции Вустер Юнион
До 29 303 350 долл. США
Транспортное управление Массачусетского залива

Мэриленд — Проект консервации хранилищ поездов Северо-восточного коридора MARC
До 9 400 000 долларов США
Администрация транзита Мэриленда

Мичиган — Изменение кривой от Ипсиланти до Джексона
До 15 570 327 долларов США
Департамент транспорта штата Мичиган

Нью-Джерси — Улучшение центральной станции транзитных перевозок Трентона
До 18 281 313 долларов США
Транзитная корпорация Нью-Джерси

Нью-Йорк — Реконструкция переходов на Гудзон-авеню и повышение безопасности
До 2 000 000 долларов США
Департамент транспорта штата Нью-Йорк

Пенсильвания — Обновление сигнальной системы линии Гаррисберга: от Паоли до Овербрука
До 15 910 000 долл. США
Транспортное управление Юго-Восточной Пенсильвании

Вирджиния — Замена моста Ньюингтон-Роуд
До 14 420 000 долларов
Департамент железнодорожного и общественного транспорта Вирджинии

Почему моя гитара звучит фальшиво? Это манекен интонации!

Почему моя гитара звучит фальшиво?

, инструктор по методу металла Дуг Маркс

Почему вы звучите фальшиво, часто зависит от вашего уровня опыта.Новички, например, звучат фальшиво, потому что они склонны дергать за струны, резко натягивая их. Идеально настроенная гитара может давать аккорды, которые звучат неуместно из-за плохой техники.

Гитаристы среднего и продвинутого уровня звучат расстроено по разным причинам. Во-первых, даже идеально настроенная гитара немного расстроена из-за дизайна. Под этим я подразумеваю основные недостатки, из-за которых даже в идеальных условиях некоторые ноты будут немного расстроены.

Новые струны помогают гармонировать с звучанием гитары

В первоначальной версии курса я объяснил: «Смена струн — это не замена масла в машине, это не продлит срок службы гитары.Вы не повредите свою гитару, если не замените струны «. Тем не менее, у новых струн есть свои преимущества — они звучат ярче и могут заставить гитару звучать гармонично (гитарная интонация) с меньшим диссонансом.

Регулировка анкерного стержня и бриджа для идеального звучания гитары

Вы когда-нибудь замечали, что одни аккорды и ноты на вашей гитаре звучат не гармонично, а другие — идеально? Например, открытый аккорд ля минор может звучать идеально, но аккорд ре-барре на пятом ладу может звучать диссонансно.Вы можете настроить отдельные струны так, чтобы аккорд D barre звучал идеально, в результате чего другие аккорды будут звучать диссонансно. Это вызвано тем, что ноты на двенадцатом ладу и за его пределами расстроены, когда открытые струны настроены на высоту тона. Дело в том, что высокочастотные обертоны не настроены, и эти обертоны возникают даже при игре открытых аккордов. Лекарство — настройте свою гитару так, чтобы ноты на двенадцатом ладу были настроены на ту же высоту, что и открытые струны. Это достигается регулировкой интонации.

Когда интонация гитары настроена должным образом, все ноты будут настроены или, по крайней мере, очень близки. Что касается физической конструкции гитары, она никогда не будет идеальной, но идея состоит в том, чтобы сделать ее как можно ближе к идеальной.

Чтобы настроить двенадцатый лад на открытую струну, вы должны немного удлинить или укоротить струну. Если двенадцатый лад немного резкий, струну нужно удлинить, чтобы сгладить высоту звука на двенадцатом. И наоборот, если нота плоская, струну нужно укоротить.Можно с уверенностью предположить, что интонация на вашей гитаре была настроена должным образом на заводе или вашим местным гитарным техником. Со временем гриф начинает двигаться, в результате чего ноты на двенадцатом ладу становятся немного резкими или плоскими. Используйте цифровой тюнер для настройки высоты звука открытых струн. Теперь проверьте настройку нот на двенадцатом ладу и выше. Вы, вероятно, заметите, что все они немного острые или все немного плоские.

Вот почему. Между струнами и анкерным стержнем постоянно идет борьба, стержень, который проходит через середину грифа, чтобы защитить гриф от деформации.Натяжение струн тянет переднюю бабку к бриджу. Это сгибает гриф, образуя разрыв между грифом и струнами. Этот смычок фактически укорачивает струны, заставляя ноты высоко на грифе звучать резкими. Анкерный стержень изгибает гриф в противоположном направлении, чтобы противодействовать натяжению струн. Затягивание анкерного стержня эффективно удлиняет струны. Поэтому, когда анкерный стержень преодолевает натяжение струн, ноты на двенадцатом ладу становятся плоскими, потому что струны удлиняются.

Подробное объяснение того, как отрегулировать интонацию на вашей гитаре, выходит за рамки данной инструкции, но эту информацию легко найти в Интернете, у производителя вашей гитары или в нашей программе настройки и ремонта гитары. Я просто собираюсь объяснить основной процесс интонирования гитары, не объясняя механику настройки различных моделей.

Во-первых, наденьте на гитару новые струны, прежде чем вносить какие-либо изменения в интонацию. Струны по-разному влияют на интонацию.Например, при изменении толщины струны это влияет на интонацию. По мере того, как струны стареют, интонация меняется, поэтому важно вносить эти корректировки, используя новые струны. После внесения этих корректировок вам, вероятно, не нужно будет делать это снова в течение нескольких месяцев, если вы продолжите использовать тот же калибр и марку струн.

При замене струн заменяйте их по одной. Если вы удалите все струны сразу, гриф и мостик вернутся в нормальное положение через несколько дней.После замены струн подождите день или два, прежде чем вносить какие-либо изменения. После смены струны требуется время, чтобы шейка и анкерный стержень успокоились. Итак, через два или три дня после замены струн настройте открытые струны на высоту тона и проверьте настройку на двенадцатом ладу и далее. Вы заметите одно из трех: 1) Все ноты будут плоскими. 2) Все ноты будут резкими. 3) Все ноты будут примерно созвучны: одни струны резкие, а другие — плоские. Для пункта 3 переходите к регулировке моста, потому что анкерный стержень отрегулирован правильно.

Если двенадцатый лад резкий, затяните анкерный стержень на четверть оборота, перенастройте открытые струны и проверьте настройку двенадцатого лада. Если он по-прежнему выключен, подождите до завтра, чтобы откорректировать еще одну четверть оборота. Довольно часто анкерный стержень застревает, но со временем встает на место. И наоборот, если ноты на двенадцатом ладу плоские, ослабьте анкерный стержень на четверть оборота. Это может занять день или два, но вы сможете правильно отрегулировать двенадцатый лад. IF анкерный стержень функционирует.Причина большого IF в том, что иногда анкерный стержень может быть полностью ослаблен, а гриф настолько изогнут (наоборот, смычок), что струны не могут подтянуть гриф в нужное положение. Это часто происходит со старинными инструментами.

При правильной настройке интонации гриф будет немного изогнут, чтобы оставалось пространство между ладами и струнами. Если бы гриф был отрегулирован идеально ровными, струны дребезжали бы о лады.

Черный пластиковый треугольник закрывает анкерный стержень.

Красная стрелка указывает на регулировочную гайку анкерного стержня.

Это инструмент, который используется для регулировки анкерного стержня. Обязательно ослабьте струны перед выполнением этой регулировки. Поверните гайку не более чем на четверть оборота. Перенастройте гитару. Подождите несколько часов, прежде чем делать вторую регулировку, потому что со временем натяжение может измениться.

Шесть винтов в верхней части этой фотографии используются для регулировки элементов моста Floyd Rose. Обратите внимание на симметрию шести частей. Три намотанные струны регулируются так, чтобы нижняя часть струны E находилась дальше всего назад, затем струна A и струна D. Размотанные струны имеют такую же симметрию, что и самая высокая струна ми, расположенная впереди.

Регулировка моста

Когда анкерный стержень отрегулирован правильно, вы, вероятно, все равно заметите, что интонация требует тонкой настройки — одни струны плоские, а другие острые.Со временем, возможно, гриф немного скрутился или калибр струны изменился. Тонкая настройка выполняется на мосту. Крошечные части перемычки, которые касаются каждой струны, перемещаются к передней бабке, чтобы сократить струну (заострять ноты на 12-м ладу), или перемещаются в противоположном направлении, чтобы сгладить ноту. Мосты Les Paul tune-o-matic легко настраиваются. Если вам не повезло (как и мне) использовать мост Флойд Роуз, мое сердце будет вам сочтено. Вам нужно ослабить каждую струну, отрегулировать, перенастроить, проверить настройку, если она не работает, ослабьте струну, отрегулируйте, перенастройте….. ненавидеть жизнь, тратить следующий час на проклятия … В любом случае, это не весело, но можно добиться, проявив немного терпения.

Заключительная мысль. Интонация, как упоминалось ранее, никогда не будет идеальной. Если ваши лады изношены, ноты, сыгранные на этих ладах, будут расстроены. Иногда лады немного всплывают, выбрасывая ноты на этих ладах. Если вы замечаете, что ноты расстроены по всему грифу, возможно, пора либо одеть лады (выровнять), либо заменить после чрезмерного использования.Трейси Лонго прекрасно объясняет эти и другие настройки на своем DVD-диске «Настройка и восстановление гитары» / «Цифровая загрузка». Он покрывает настройки для наиболее распространенных типов гитар и бриджей, включая Strats, Gibson и Floyd Rose.

Дуг Маркс, инструктор по методу металла и автор Полного базового курса и классических гитарных фраз

Произошла ошибка при настройке пользовательского файла cookie

Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности.Если ваш браузер не принимает файлы cookie, вы не можете просматривать этот сайт.

Настройка вашего браузера для приема файлов cookie

Существует множество причин, по которым cookie не может быть установлен правильно. Ниже приведены наиболее частые причины:

В вашем браузере отключены файлы cookie. Вам необходимо сбросить настройки вашего браузера, чтобы он принимал файлы cookie, или чтобы спросить вас, хотите ли вы принимать файлы cookie.
Ваш браузер спрашивает вас, хотите ли вы принимать файлы cookie, и вы отказались.Чтобы принять файлы cookie с этого сайта, нажмите кнопку «Назад» и примите файлы cookie.
Ваш браузер не поддерживает файлы cookie. Если вы подозреваете это, попробуйте другой браузер.
Дата на вашем компьютере в прошлом. Если часы вашего компьютера показывают дату до 1 января 1970 г., браузер автоматически забудет файл cookie. Чтобы исправить это, установите правильное время и дату на своем компьютере.
Вы установили приложение, которое отслеживает или блокирует установку файлов cookie.Вы должны отключить приложение при входе в систему или проконсультироваться с системным администратором.

Почему этому сайту требуются файлы cookie?

Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности, запоминая, что вы вошли в систему, когда переходите со страницы на страницу. Чтобы предоставить доступ без файлов cookie потребует, чтобы сайт создавал новый сеанс для каждой посещаемой страницы, что замедляет работу системы до неприемлемого уровня.

Что сохраняется в файле cookie?

Этот сайт не хранит ничего, кроме автоматически сгенерированного идентификатора сеанса в cookie; никакая другая информация не фиксируется.

Как правило, в файлах cookie может храниться только информация, которую вы предоставляете, или выбор, который вы делаете при посещении веб-сайта. Например, сайт не может определить ваше имя электронной почты, пока вы не введете его. Разрешение веб-сайту создавать файлы cookie не дает этому или любому другому сайту доступа к остальной части вашего компьютера, и только сайт, который создал файл cookie, может его прочитать.

Страница не найдена | MIT

Перейти к содержанию ↓

Образование
Исследовательская работа
Инновации
Прием + помощь
Студенческая жизнь
Новости
Выпускников
О MIT
Подробнее ↓
- Прием + помощь
- Студенческая жизнь
- Новости
- Выпускников
- О MIT

Меню ↓ Поиск Меню Ой, похоже, мы не смогли найти то, что вы искали!
Попробуйте поискать что-нибудь еще! Что вы ищете? Увидеть больше результатов

Предложения или отзывы?

JCB_201407071 1..13

% PDF-1.4 % 1 0 объект > эндобдж 7 0 объект /Заголовок /Предмет / Автор /Режиссер / Ключевые слова / CreationDate (D: 20210713103616-00’00 ‘) / ModDate (D: 20180611082413-07’00 ‘) / В ловушке / Ложь >> эндобдж 2 0 obj > эндобдж 3 0 obj > эндобдж 4 0 obj > эндобдж 5 0 obj > эндобдж 6 0 obj > ручей uuid: 9c42b17d-1dd1-11b2-0a00-1e0098a1ccffadobe: docid: indd: b1fdd289-58ad-11e4-ab86-80d841669557устойчивый: pdfe3a3e90e-586c-11e4-93b5-ec99cf17b19309: docid-ec99f17b199329: indd193d09ecf09e-9e4-93b5-ec99cf17b195 СсылкаStream342.00342.00Inchesxmp.iid: 08C869AEA754E411B2178AD009741E3Dxmp.did: 07801174072068118DBB9C4E0CA30319

ReferenceStream440.38440.38Inchesxmp.iid: E75F932E9B45E411A202CE35A3C4C6E2xmp.did: 01801174072068118F62F922404183FC

ReferenceStream300.00300.00Inchesxmp.iid: EFC07D811E56E4118FFABD65998CE1A3xmp.did: 0180117407206811816C8A47E1BF1623

ReferenceStream334.07334.07Inchesxmp.iid: 07C869AEA754E411B2178AD009741E3Dxmp.did: 0A801174072068118F62F922404183FC

СсылкаStream345.53345.53Inchesxmp.iid: 186C99236558E411B4E3AA22F06F6D19xmp.did: D39C89DC0E206811994C82857322AB87

ReferenceStream350.45350.45Inchesxmp.iid: DCFF343B9D45E411A202CE35A3C4C6E2xmp.did: 018011740720681182068534A7337D30

ReferenceStream300.00300.00Inchesxmp.iid: E05F932E9B45E411A202CE35A3C4C6E2xmp.did: 0380117407206811A87ADC75EBF7907E

2014-11-03T22: 03: 55 + 05: 302018-06-11T08: 24: 13-07: 002018-06-11T08: 24: 13-07: 00Adobe InDesign CS2 (4.0)

JPEG256256 / 9j / 4AAQSkZJRgABAgEASABIAAD / 7QAsUGhvdG9zaG9 + 0AAAAAABAASAAAAAEA AQBIAAAAAQAB / + 4AE0Fkb2JlAGQAAAAAAQUAAu64 / 9sAhAAKBwcHBwcKBwcKDgkJCQ4RDAsLDBEU EBAQEBAUEQ8RERERDxERFxoaGhcRHyEhISEfKy0tLSsyMjIyMjIyMjIyAQsJCQ4MDh8XFx8rIh0i KzIrKysrMjIyMjIyMjIyMjIyMjIyMjI + Pj4 + PjJAQEBAQEBAQEBAQEBAQEBAQEBAQED / wAARCAEA AMUDAREAAhEBAxEB / 8QBogAAAAcBAQEBAQAAAAAAAAAABAUDAgYBAAcICQoLAQACAgMBAQEBAQAA AAAAAAABAAIDBAUGBwgJCgsQAAIBAwMCBAIGBwMEAgYCcwECAxEEAAUhEjFBUQYTYSJxgRQykaEH FbFCI8FS0eEzFmLwJHKC8SVDNFOSorJjc8I1RCeTo7M2F1RkdMPS4ggmgwkKGBmElEVGpLRW01Uo GvLj88TU5PRldYWVpbXF1eX1ZnaGlqa2xtbm9jdHV2d3h5ent8fX5 / c4SFhoeIiYqLjI2Oj4KTlJ WWl5iZmpucnZ6fkqOkpaanqKmqq6ytrq + hEAAgIBAgMFBQQFBgQIAwNtAQACEQMEIRIxQQVRE2Ei BnGBkTKhsfAUwdHhI0IVUmJy8TMkNEOCFpJTJaJjssIHc9I14kSDF1STCAkKGBkmNkUaJ2R0VTfy o7PDKCnT4 / OElKS0xNTk9GV1hZWltcXV5fVGVmZ2hpamtsbW5vZHV2d3h5ent8fX5 / c4SFhoeIiY qLjI2Oj4OUlZaXmJmam5ydnp + So6SlpqeoqaqrrK2ur6 / 9oADAMBAAIRAxEAPwDs2KuxV2KuxV2K uxV2KuxV2KuxV2KuxV2KuxV2KuxV2KuxV2KpPqPmrRNKums72do5kAJUI7bMKjdVIxVCHz15bKnj cttuf3Uny / lwFIQ0nnnRD9i7f / kW / wDzTlUhPo2xOPqoxebrW7nW3tbp2kevEcGHQV7r7ZTk8WIt yMXgyNUqTarqC / ZnYfdmNLUZO9zYaXEf4UJ + mtU50 + svT6P6ZX + ay3zbvyWCvpZzm5eedirsVdir sVdirsVdirsVdirsVdirsVdirsVdirsVdirsVWGONjVkUnxIBxVa0ELCnBR / sRgItINIeTTYn / lH + xGVyxX1bY5q6Id9DRjUSBT7J / zdlctLfVtjrK6IeTy1z / 4 + af8APP8A5vys6C + rdHtKv4ftUf8A CXxcvrf / ACT / AOvmQ / k7 + l9jP + V9vp + 39jI82Dq3Yq0CDUA1I2PseuKqNpfWWoRmawuIrqNW4l4H WRQ1A1CUJFaMMVV8VdirWKuxVvFXYq7FXYq7FVkssUETzzusUUal3kchVVQKlmY7ADFV + KoW / wBT 03SoVuNUu4LGFmEayXMiRIXILBQ0jKK0U7YqiVYMAykEEVBG4IOKt4qs9SP1BDzX1CvMJUcuINOV OtKnFWop4bhS8EiyqrPGWRgwDxsY3Wo7qykEdjiqpirsVdirsVdirsVdirGdB0LXdPv9QvNSu4bi PWAZp4ohIpgnB4IqOxPNRERHypHtGvw1LHFUj0fyL5p0aN7ez1ZYIpoogWSWVvTmh076grLE8ZDB piHILCgjQAdgqi7vyz5xfTpktdSQXbRxJDHLd3vpoonupnjaaF45CVjkiUS05vw + LZjiq + Dy75yV Z / X1JZJnNz9VuBdXA9BpUPCZoBGIpvjPwxMAsagULNUlVCSeTvN95ps1rf6nG0lzZSWcka3F28Ki RL / oJncvR5YPjer8VYVpsVUT5l8peYL / AFm41TRb36utxYR2SJ9cubYpPG8rpdMbdX9T0xJQRts3 Ik + 6rHLuHzrL9e9BdRX12W3t63GoJxvB69bg8ITwT41 + Ba22395sKqpzceXvNWkpql / 9fmu4ri6n lW1tpbnkLaa6tJkjRIhWMiMTh4iUyDlVeRAGKoldG803 / lS0t1meO9rdkrLfXlu6CWSU2jtcpEZ5 PRRlHCRRy / aoRiqBn0nzlcl / Qnubf69qVykPK7uR6CR / pT07uSinjHvDwgFY24rWnM0VTO48team lle21QxtMblo5jc3BFs0kt0yMts3KOYNFJEvFiqxlKp1xVBDyh5rmi1S2u7lJLXUYJ4LW2k1K9uF s / VgeI8mlhBuBI5B + Onp0 + CtcVTjUdA1250e3sbW + Ed1ay3pSdpZi3pSw3tvaAy7yl09ePk1a / CT WuKqr6TrkcGmLEbe8l0 + 6uJA11NNVYnFxBbtzMczyOkE1G5Ecj + 13xVL4vKWs2Mdna2GoObe0Cw0 a6nj4LBHbRW0qxxgo1FhfnFsjF6tXiMVQN3ofnW0sbet29zKjLC5hvbou63MrQtG9IhQJ66ytcAB kCEJGq7YqiZvJ / mC4aFpr8OvpPbTRPcXDgW836R9SIuRWfgLiBVeQV / dlvhJxVG6N5e1uw1k3d1O rWZknnCRXM4UNcfG8RtOCwsPWeST1SeXxUpQYqyrFXYq7FXYq7FXYq7FWEXS / mSuooLPi9oXuJi0 klsFAjnnaG3dRb8yssSxBWU1Xk / Ik8eKrd1 / ysWLUnt1Dz6akUIN3ZvZrPIwWL1DBDdxcBJ6vPl6 jcPTpxHMbqqvli083WuqvLqyv9WvVSa5qbfj64s7GF2b0izcvVhccUATqa / ZxVLrHSvPsNrY6Uzz W9vbW + noWhktgi + jJppm + PeYyUS55VrGy8RuScVRYl / Mn / DVy0tqP0wLlRHHDPah3hovNonkgaFV 5 / ZWRWbhsSW3xVwT8xBBMbppGMsnIrZmy9WOPneqI7X6wix0otuzGUk0LU + LbFUPodr + YGnaPZ2U 6y + taJawugNkYSkZC8YXJMnH0lAnaTk3L + 6BGKqyw / mRM9urTy2yVh2xqWJJdntUk + r0jk / cKjSv FzHqVWj9gVVgtfPmoXNumpxukAeyuLiPla + gksN3YTsLdoj654xJL6nqbFvs7UxVWNn56t2vmjub l7cyyvbxQtZvNxlvLxx6TXilRwhEFFdqBWYD4gvFVJH8sefxetr8DKdYaKMj1GgEXrFNGWYHgocI xgnBCt0UU + 0eSqb / AFHzl + lo763W6WGeOwhuDdSWaz / 6PezySmZbU + nT6vIf7s71AIPxUVQjax5v 0260vTdYuplu7iW0CLF9RJnEr2ouxMpjRmWMvIq / V15Ko5PtRsVTbXNO81apqM1oKfoj6xZyoAYa GOK4sZXpyBcsAk5kDfCR6YXfniq2 / wDL2uS6hqd5aykR3mp6dMIJJKxtbWv6Pd5I1r8Dh5ZAenId f2cVQi235hvLb3V3LOojjnjnSza0EpLGxYGJJ / 8ARz + 8Sb0y + 4ipyo5NVU48qWOvafNqEeqMzWs8 81zbB2iPBpru8kZF9JQ1DGYm + InckClKYqyTFXYq7FXYq7FXYq7FXYqwiRfzCLzmBrgFHDqsp08R OyR3zGOAojv6DyC3X95SShO43xVW07S / ME8vmKTWo7iQX9nFaQr6tvGXKG99RbVrf7CUnX02l + P + bpiqCjt / PltbpbafbyWaRxXK20EA09LVE9K6 + qiZW5utx6vpchHWL6K4qvkuvPJ1R9Ot3mc2luGn IFnRonl1GOKVWZE / 0mRYIWUf3Q + LmBtiqnc2nny5nspZ1uma0llmhMbaeFWIw3cMZmDEE3nGVRRf 3HL2rirMNE / Sf6Ni / S9frXKSvP0 / U9P1H9h2fQ / dep6fHnw + HlXjtiqPxV2KuxV2KuxV2KuxV2Ku xV2KuxV2KuxV2KuxV2KuxV2KuxVL / wBPaF / 1crT / AJHx / wDNWKu / T2hf9XK0 / wCR8f8AzVirT + Yd CRS51G2IHXjKjH7lYnFW / wBP6H / 1cbUexmjB + 4tirv09oX / VytP + R8f / ADVirv09oX / VytP + R8f / ADViqz / Emgep6Q1G3Le0i8fH7VaYqv8A09oX / VytP + R8f / NWKu / T2hf9XK0 / 5Hx / 81Yq0 / mHQkUu dRtiB14yox + 5WJxVv9P6H / 1cbUexmjB + 4tirv09oX / VytP8AkfH / AM1YqtXzHoDsyjUbYFdjWVVH 0FiAfoxVd + ntC / 6uVp / yPj / 5qxV36e0L / q5Wn / I + P / mrFXfp7Qv + rlaf8j4 / + asVd + ntC / 6uVp / y Pj / 5qxVXs9RsdRDtYzpOIjxcoa0PgcVROKuxV2KuxV2KuxV2KsNabyIjFJLHg6khlNtLUEbEGinF WvrHkH / ljH / SNL / zRiqtban5Js5hPa2xilUEBltpa0Ox / YxVTe78hyOzvZ8mYlmJtpdyf9hiq36x 5B / 5Yx / 0jS / 80Yq76x5B / wCWMf8ASNL / AM0YqihrflBbP6gIWFrQj0vq0vGhPI / seOKoX6x5B / 5Y x / 0jS / 8ANGKu + seQf + WMf9I0v / NGKq1tqfkmzmE9rbGKVQQGW2lrQ7H9jFUbYaZ5U1lJLq2sY3Ac h3eJkJY / EdnA8cVRX + FvLv8A1b4f + BxVWn0LR7mKGGezikjtxxiUrsoNNh / wOKqP + FvLv / Vvh / 4H FXf4W8u / 9W + H / gcVd / hby7 / 1b4f + BxV3 + FvLv / Vvh / 4HFUzjiiiHGJAgAAoBTYdMVX4q7FXYq7FX Yq7FXYqwdvL3mIO3EOFqaBL + VVpX9lSpIGKtf4e8yeEv / cRk / wCaMVd / h7zJ4S / 9xGT / AJoxV3 + H vMnhL / 3EZP8AmjFXf4e8yeEv / cRk / wCaMVd / h7zJ4S / 9xGT / AJoxV3 + HvMnhL / 3EZP8AmjFXf4e8 yeEv / cRk / wCaMVd / h7zJ4S / 9xGT / AJoxVknl / TriwtG + tvIZ5TV1kmacLQkLxZgOo64qmuKuxV2K uxV2KuxV2KuxV2KuxV2KuxV2KuxV2KpI3mmz + vPZw2t5cRwzi1mvIIS8EcxKrwYg8zQvQlVIXuRi qGuvPeh3d1NaTet6lvI0T0QEckJU0 + L2xVS / 5WJ5f8J / + RY / 5rxV3 / KxPL / hP / yLH / NeKu / 5WJ5f 8J / + RY / 5rxV3 / KxPL / hP / wAix / zXirv + VieX / Cf / AJFj / mvFXf8AKxPL / hP / AMix / wA14q7 / AJWJ 5f8ACf8A5Fj / AJrxVGaV5w0jWLxbG09X1XDMOaACiip35HFVbWvMum6DJFFfepymUsvpqG2BpvuM VS3 / AJWJ5f8ACf8A5Fj / AJrxV3 / KxPL / AIT / APIsf814q7 / lYnl / wn / 5Fj / mvFXf8rE8v + E // Isf 814q7 / lYnl / wn / 5Fj / mvFXf8rE8v + E // ACLH / NeKu / 5WJ5f8J / 8AkWP + a8Vd / wArE8v + E / 8AyLH / ADXirv8AlYnl / wAJ / wDkWP8AmvFWRWd1FfWsN5BX050WROQoaMKiuKq + KuxV2KuxVgWpajaaWLzX fLeotHcLe + jeaJNxK3Fy0iROiRSUkjlk6qymh + 0RTFV + oaneR391GvmeK2VJpFEBgqYwGI4E + ma8 emKof9LXv / U2Q / 8ASP8A9e8Vd + lb6lf8WQ0 / 5h / + veKu / S17 / wBTZD / 0j / 8AXvFXfpa9 / wCpsh / 6 R / 8Ar3irv0te / wDU2Q / 9I / 8A17xV36Wvv + psh / 5EH / qnirv0te / 9TZD / ANI // XvFUz8vahdXGqRx S6 / HqKlWrbrFwLUB35cB0xVFeabye1nt1h2hNJDIxKPH6nPfr9lumKpF + lr3 / qbIf + kf / r3irv0t e / 8AU2Q / 9I // AF7xV36Wvf8AqbIf + kf / AK94q79LXv8A1NkP / SP / ANe8Vd + lr3 / qbIf + kf8A694q 79LXv / U2Q / 8ASP8A9e8Vd + lr3 / qbIf8ApH / 694q79LXv / U2Q / wDSP / 17xV36Wvf + psh / 6R / + veKs 40x2k062kecXTNEpM4HESEj7YG1K4qisVdirsVdirCy / mI3YvzaaGbsDiLg / 3tPD1PU5fjiqlJBr MsjSy6doDyOSzuygszE1JJL7k4qt + q6t / wBWzy9 / wC / 814q76rq1Kfozy9T / AFF / 5rxV31XVv + rZ 5e / 4Bf8AmvFXfVdW / wCrZ5e / 4Bf + a8Vd9V1b / q2eXv8AgF / 5rxV31XVv + rZ5e / 4Bf + a8Vd9V1b / q 2eXv + AX / AJrxVMdCgv49SRrix0i3Ti1ZLJQJht + zRjt44qifMsN5LNAba0025AU8jqKgsN / 2KsNs VSX6rq3 / AFbPL3 / AL / zXirvqurf9Wzy9 / wAAv / NeKu + q6t / 1bPL3 / AL / AM14q76rq3 / Vs8vf8Av / ADXirvqurf8AVs8vf8Av / NeKu + q6t / 1bPL3 / AAC / 814q76rq3 / Vs8vf8Av8AzXirvqurf9Wzy9 / w C / 8ANeKu + q6t / wBWzy9 / wC / 814qzLTg62FusiRRuI1DJb7RKadI / 8nwxVE4q7FXYq7FXnf6Ji / 6k 6X / pNkxV36Ji / wCpOl / 6TZMVd + iYv + pOl / 6TZMVd + iYv + pOl / wCk2TFXfomL / qTpf + k2TFXfomL / AKk6X / pNkxV36Ji / 6k6X / pNkxV36Ji / 6k6X / AKTZMVd + iYv + pOl / 6TZMVTTy7p8dvqkcq + XH0whX h2lrl5QtR04NtviqK81WaXU9uW0R9Y4ow5rO0Pp7 / ZovWuKpD + iYv + pOl / 6TZMVd + iYv + pOl / wCk 2TFXfomL / qTpf + k2TFXfomL / AKk6X / pNkxV36Ji / 6k6X / pNkxV36Ji / 6k6X / AKTZMVd + iYv + pOl / 6TZMVd + iYv8AqTpf + k2TFXfomL / qTpf + k2TFWc6Wgj062jEBtAsSD6uWLmOg + xyPWnjiqLxV2Kux V2KvLvX0X / f + vf8AJP8A5rxV3r6L / v8A17 / kn / zXirvX0X / f + vf8k / 8AmvFXevov + / 8AXv8Akn / z XirvX0X / AH / r3 / JP / mvFXevov + / 9e / 5J / wDNeKu9fRf9 / wCvf8k / + a8Vd6 + i / wC / 9e / 5J / 8ANeKu 9fRf9 / 69 / wAk / wDmvFU38rS6a2sRC2l1V5OL0F5w9L7JrXixNfDFUb5zksUuLb63JqCEo3H6hx40 qPt8mG + Ksb9fRf8Af + vf8k / + a8Vd6 + i / 7/17 / kn / AM14q719F / 3 / AK9 / yT / 5rxV3r6L / AL / 17 / kn / wA14q719F / 3 / r3 / ACT / AOa8Vd6 + i / 7 / ANe / 5J / 814q719F / 3 / r3 / JP / AJrxV3r6L / v / AF7 / AJJ / 814q719F / wB / 69 / yT / 5rxV6JpBjOl2hiMjRmFOJnp6pFB9un7XjiqNxV2KuxV2KvOP0uf + pub / pE l / 5pxV36XP8A1Nzf9Ikv / NOKu / S5 / wCpub / pEl / 5pxV36XP / AFNzf9Ikv / NOKu / S5 / 6m5v8ApEl / 5pxV36XP / U3N / wBIkv8AzTirv0uf + pub / pEl / wCacVd + lz / 1Nzf9Ikv / ADTirv0uf + pub / pEl / 5p xVNPLmofWNVji / xC2pVVz9WNvJHyop35MoG2Kp5rOm6vfSRNpupHT1RSHUJz5EnY9RiqXf4e80 / 9 TC3 / ACJH / NWKu / w95p / 6mFv + RI / 5qxV3 + HvNP / Uwt / yJH / NWKu / w95p / 6mFv + RI / 5qxV3 + HvNP8A 1MLf8iR / zVirILGGe3tIobqb6zMigPMRTmfGmKojFXYq7FXYq7FXYq7FXYqhP0Xpn / LHB / yKT / mn FXfovTP + WOD / AJFJ / wA04q79F6Z / yxwf8ik / 5pxV36L0z / ljg / 5FJ / zTirv0Xpn / ACxwf8ik / wCa cVd + i9M / 5Y4P + RSf804q79F6Z / yxwf8AIpP + acVd + i9M / wCWOD / kUn / NOKu / Remf8scH / IpP + acV XxWFjA4kgtoonHRkRVO / uBiqIxV2KuxV2KuxV2KuxV2KuxV2KuxV2KuxV2KuxVZ60P8AvxfvGKu9 aH / fi / eMVd60P + / F + 8Yq71of9 + L94xVcCCKjcHocVbxV2KuxV2KuxV2KuxV2KuxV2KuxV2KuxV2K uxV2KuxV2KuxV2KsD / с 5A / 6uQ / 6SE / pirv8P + QP + rkP + khP6Yq7 / D / kD / q5D / pIT + mKu / w / 5A / 6 uQ / 6SE / pirJLXW / Llnaw2kOo2 / p28axJWVSeKAKK7 + 2Kqv8AiPQP + rjbf8jV / rirv8R6B / 1cbb / k av8AXFXf4j0D / q423 / I1f64q7 / Eegf8AVxtv + Rq / 1xVWttZ0m8lEFpeQzysCQkbqzEDc7A4quu9U 06wZVvrmK3ZxVRK4UkDwriqH / wAR6B / 1cbb / AJGr / XFXf4j0D / q423 / I1f64q7 / Eegf9XG2 / 5Gr / AFxV3 + I9A / 6uNt / yNX + uKu / xHoH / AFcbb / kav9cVd / iPQP8Aq423 / I1f64q7 / Eegf9XG2 / 5Gr / XF Xf4j0D / q423 / ACNX + uKu / wAR6B / 1cbb / AJGr / XFUwiliniSaFxJHIAyOpqGB6EHFV + KuxV2KuxV5 ryi / n8uf8BJ / 1TxV3KL + fy5 / wEn / AFTxV3KL + fy5 / wABJ / 1TxV3KL + fy5 / wEn / VPFXcov5 / Ln / AS f9U8Vdyi / n8uf8BJ / wBU8Vdyi / n8uf8AASf9U8Vdyi / n8uf8BJ / 1TxV3KL + fy5 / wEn / VPFU18tNG dWj4toxPF9rFXE32T9ksgFPHFUZ5uKCe25Npi / A3 / HSVmbqPscVbbxxVj3KL + fy5 / wABJ / 1TxV3K L + fy5 / wEn / VPFXcov5 / Ln / ASf9U8Vdyi / n8uf8BJ / wBU8Vdyi / n8uf8AASf9U8Vdyi / n8uf8BJ / 1 TxV3KL + fy5 / wEn / VPFXcov5 / Ln / ASf8AVPFXcov5 / Ln / AAEn / VPFWf6VT9GWtPSI9JN7cERdP911 p8PhiqLxV2KuxV2KvNvrFn / y1aH / ANIR / wCqWKu + sWf / AC1aH / 0hH / qlirvrFn / y1aH / ANIR / wCq WKu + sWf / AC1aH / 0hH / qlirvrFn / y1aH / ANIR / wCqWKu + sWf / AC1aH / 0hH / qlirvrFn / y1aH / ANIR / wCqWKu + sWf / AC1aH / 0hH / qlirvrFn / y1aH / ANIR / wCqWKpr5amtn1aNY59Lkbi / w2dsYpfsno / p r9OKovzdLBHPbiWbT4iUagvoDMx3 / YIRqDFWP / WLP / lq0P8A6Qj / ANUsVd9Ys / 8Alq0P / pCP / VLF XfWLP / lq0P8A6Qj / ANUsVd9Ys / 8Alq0P / pCP / VLFXfWLP / lq0P8A6Qj / ANUsVd9Ys / 8Alq0P / pCP / VLFXfWLP / lq0P8A6Qj / ANUsVd9Ys / 8Alq0P / pCP / VLFXfWLP / lq0P8A6Qj / ANUsVZ9pRVtNtSrR spiSjQLwjIp + wtBRfDFUXirsVdirsVebfpW0 / wCrvp // AHDW / wCqOKu / Stp / 1d9P / wC4a3 / VHFXf pW0 / 6u + n / wDcNb / qjirv0raf9XfT / wDuGt / 1RxV36VtP + rvp / wD3DW / 6o4quTUbaQ0XV9P2FTXTi o + 9ohiq / 65B / 1eNM / wCkEf8AVPFXfXIP + rxpn / SCP + qeKu + uQf8AV40z / pBH / VPFUy8v3cDapEo1 KyuSwYCK3tfScniejhBTFUT5uu4bae3Et7bWhZGIFxam4Lb9QQj0xVj / AOlbT / q76f8A9w1v + qOK u / Stp / 1d9P8A + 4a3 / VHFXfpW0 / 6u + n / 9w1v + qOKu / Stp / wBXfT / + 4a3 / AFRxV36VtP8Aq76f / wBw 1v8Aqjirv0raf9XfT / 8AuGt / 1RxV36VtP + rvp / 8A3DW / 6o4q79K2n / V30 / 8A7hrf9UcVd + lbT / q7 6f8A9w1v + qOKs + 0p1k021kV1lVokIkjT01YEdVSg4j2xVF4q7FXYq7FXnH6Vh / 6mWD / uGD / qjirv 0rD / ANTLB / 3DB / 1RxV36Vh / 6mWD / ALhg / wCqOKu / SsP / AFMsH / cMH / VHFXfpWH / qZYP + 4YP + qOKu / SsP / Uywf9wwf9UcVd + lYf8AqZYP + 4YP + qOKu / SsP / Uywf8AcMH / AFRxV36Vh / 6mWD / uGD / qjiqa eXL6K41WOMa1Ffni5EC2IgJop39T01pT54qivN18tpPbK2pJp / JGPFrVbnlQjerK1MVY9 + mY / wDq YYv + 4Yn / AFTxV36Zj / 6mGL / uGJ / 1TxV36Zj / AOphi / 7hif8AVPFXfpmP / qYYv + 4Yn / VPFXfpmP8A 6mGL / uGJ / wBU8Vd + mY / + phi / 7hif9U8Vd + mY / wDqYYv + 4Yn / AFTxV36Zj / 6mGL / uGJ / 1TxV36Zj / AOphi / 7hif8AVPFWf6VIJdMtZBKJw8Sh2Qnph6j7XAU418MVReKuxV2KuxV5x + mYf + pob / uHDFXf pmH / AKmhv + 4cMVd + mYf + pob / ALhwxV36Zh / 6mhv + 4cMVd + mYf + pob / uHDFXfpmH / AKmhv + 4cMVd + mYf + pob / ALhwxV36Zh / 6mhv + 4cMVd + mYf + pob / uHDFU18ualHc6rHEuuNqBKufq5sxDWinf1PbFU X5svktJ7dW1Y6XyRjxFt9Y50PWvamKsf / TMP / U0N / wBw4Yq79Mw / 9TQ3 / cOGKu / TMP8A1NDf9w4Y q79Mw / 8AU0N / 3Dhirv0zD / 1NDf8AcOGKu / TMP / U0N / 3Dhirv0zD / ANTQ3 / cOGKu / TMP / AFNDf9w4 Yq79Mw / 9TQ3 / AHDhirPNLkEum2sgm + sh5kPrFPT9So + 1w / Zr4Yqi8VdirsVdirz / APSv / a + 1D / pE xV36V / 7X2of9ImKu / Sv / AGvtQ / 6RMVd + lf8Atfah / wBImKu / Sv8A2vtQ / wCkTFXfpX / tfah / 0iYq 79K / 9r7UP + kTFXfpX / tfah / 0iYq79K / 9r7UP + kTFUy8v3 / r6nHH + lby8qrfuZ7f00NAdy3tiqK80 Xn1aeBf0jc2HJGPG3h9UNv1Y9sVSP9K / 9r7UP + kTFXfpX / tfah / 0iYq79K / 9r7UP + kTFXfpX / tfa h / 0iYq79K / 8Aa + 1D / pExV36V / wC19qH / AEiYq79K / wDa + 1D / AKRMVd + lf + 19qH / SJirv0r / 2vtQ / 6RMVZtpj + pp9tJ6rT8olPqyLxd6j7TL2JxVFYq7FXYq7FXn / ANd / 7WWt / wDInFXfXf8AtZa3 / wAi cVd9d / 7WWt / 8icVd9d / 7WWt / 8icVd9d / 7WWt / wDInFXfXf8AtZa3 / wAicVd9d / 7WWt / 8icVd9d / 7 WWt / 8icVd9d / 7WWt / wDInFUy8v3Pq6nGn13U56q3wXcfGI7Hqf1YqivNE / ozwD61f21UbaxTmp3 / AG / fFUj + u / 8Aay1v / kTirvrv / ay1v / kTirvrv / ay1v8A5E4q767 / ANrLW / 8AkTirvrv / AGstb / 5E 4q767 / 2stb / 5E4q767 / 2stb / AOROKu + u / wDay1v / AJE4q767 / wBrLW / + ROKs20xuen2zc5JKxKec wpI23Vx4 + OKorFXYq7FXYqx3 / Cc3 / V81T / pIP9MVd / hOb / q + ap / 0kH + mKu / wnN / 1fNU / 6SD / AExV 3 + E5v + r5qn / SQf6Yq7 / Cc3 / V81T / AKSD / TFXf4Tm / wCr5qn / AEkH + mKu / wAJzf8AV81T / pIP9MVd / hOb / q + ap / 0kH + mKu / wnN / 1fNU / 6SD / TFUVp2gSafdLctql9dhQR6VxMXjNRSpWnbFUD5qfjPb / H qyfA3 / HL + z1 / 3Z8Q38MVSh2f + LvM / wB3 / N + Ku9X / AIu8z / d / zfirvV / 4u8z / AHf834q71f8Ai7zP 93 / N + Ku9X / i7zP8Ad / zfirvV / wCLvM / 3f834q71f + LvM / wB3 / N + Ku9X / AIu8z / d / zfirvV / 4u8z / AHf834qzrTDXTrY1mNYk3uf747f7t / yvHFUVirsVdirsVSb9O3n / AFZr37ov + quKu / Tt5 / 1Zr37o v + quKu / Tt5 / 1Zr37ov8Aqrirv07ef9Wa9 + 6L / qrirv07ef8AVmvfui / 6q4q79O3n / Vmvfui / 6q4q 79O3n / Vmvfui / wCquKomx1O4vJjFLp9zaKFLepNw41FNvgdjXFUwxV2KsZ81Jynt / g1Z / GB / AI5f 2ev + 7PhO / hiqQ + l / xT5n + / 8A5sxV3pf8U + Z / v / 5sxV3pf8U + Z / v / AObMVd6X / FPmf7 / + bMVd6X / F Pmf7 / wDmzFXel / xT5n + // mzFXel / xT5n + / 8A5sxV3pf8U + Z / v / 5sxV3pf8U + Z / v / AObMVZ1pgpp1 sKTCkSbXP98Nv92 / 5XjiqKxV2KuxV2KvJ / Tuv + WaL7tS / wCasVd6d1 / yzRfdqX / NWKu9O6 / 5Zovu 1L / mrFXCO6P / AB7Rd + 2o9v8AZYq707r / AJZot / bUf + asVd6d1Uj6tFt7aif + NsVd6d1 / yzRfdqX / ADVirvTuf + WaL7tS / wCasVd6d1 / yzRfdqX / NWKp15TSca1EXgjjXi / xKLyv2T / y0HhirJtb8wxaL JFHJF6vqqWB9WKOlDT / drrXFUs / x3bf8so / 6Sbb / AKq4q7 / Hdt / yyj / pJtv + quKu / wAd23 / LKP8A pJtv + quKu / x3bf8ALKP + km2 / 6q4q7 / Hdt / yyj / pJtv8Aqrirv8d23 / LKP + km2 / 6q4q7 / AB3bf8so / wCkm2 / 6q4q7 / Hdt / wAso / 6Sbb / qrirv8d23 / LKP + km2 / wCquKsks7kXlpDdqOImRXC1DU5Cv2lJ B + jFVfFXYq7FXYq8n9O6 / wCWaL7tS / 5qxV3p3X / LNF92pf8ANWKu9O6 / 5Zovu1L / AJqxV3p3X / LN F92pf81Yq707r / lmi + 7Uv + asVd6d1 / yzRfdqX / NWKu9O6 / 5Zovu1L / mrFU6i8pa3NEkqx2AWRQwB nvgaEV3HPFV3 + Dtc / wB96f8A8j77 / mvFUy0Hy5qmnakl1dJaCJVYEwS3TvUigoJmK4qs85 + v9Ytv ReVBwavp86de / C2n / hirG63v + / bn / kt / 3j8VdW9 / 37c / 8lv + 8firq3v + / bn / AJLf94 / FXVvf9 + 3P / Jb / ALx + Kure / wC / bn / kt / 3j8VdW9 / 37c / 8AJb / vh5qqW8OoXMyW8Us / ORgq8mkUVPizaeAMVTT / AAv5j / 37 / wBPQ / 7I8Vd / hfzH / v3 / AKeh / wBkeKsw06GW3sbeCc1ljjVXNeXxAb / FxWv3DFUTirsV dirsVdirsVdirsVdirsVdirsVdirsVdirsVdirsVdirsVdirsVdirsVdirsVdirsVdirzP8ARzf9 Wg / 9w + 6 / 7KMVd + jm / wCrQf8Auh4X / ZRirv0c3 / VoP / cPuv8AsoxV36Ob / q0H / uh4X / ZRirKbDVbD TLcW1lpGowx15FVtZKcj1PxE + GKsgjf1I0k4svNQ3FxRhUVow7HFV + KuxV2KuxV2KuxV2KuxV2Ku xV2KuxV2KqVzOLaB5yjyiMcuESl3b2VR1OKoK31pLiGeYWV7H9XUMUkt2V3rXaNT9o7Yqqafqi6i ZAtrdW3p0NbqFog1a / Z5demKo7FXYq7FXYq7FXYq7FXYq7FXYq7FXYq7FXYq7FXYq7FXYq7FXYq7 FXYq7FXYq7FXYq // 2Q ==

application / pdf

JCB_201407071 1.nu! _N> G ZzGb5Wkjd8 | ‘pW {USK @ ŠhjvC @ Z $
i ڇ ToXE @ l: h> i ‘| n # 5Q8kDhM7? O1O z`RE &; 0GjBy5GrU + bY
Три цитозольные изоформы НАД-малатдегидрогеназы Arabidopsis thaliana: на перекрестке между потоками энергии и редокс-сигнализацией | Биохимический журнал
В клетках дрожжей и животных митохондриальные нарушения, являющиеся результатом дисбаланса в дыхательной цепи, требуют активности малатдегидрогеназы (МДГ) для перенаправления потоков восстанавливающих эквивалентов.У растений, помимо митохондрий, пластиды используют малатные клапаны для уравновешивания и поддержания окислительно-восстановительного гомеостаза. Arabidopsis экспрессирует три цитозольные изоформы MDH, а именно cyMDh2, cyMDh3 и cyMDh4, причем последний обладает N-концевым удлинением, несущим уникальный остаток цистеина C2. В этом исследовании были проанализированы окислительно-восстановительные эффекты на активность и структуру всех трех изоформ cyMDH in vitro . cyMDh2 и cyMDh3 обратимо инактивировались обработкой диамидом, что сопровождалось димеризацией через образование дисульфидного мостика.Напротив, cyMDh4 образует димеры и высшие олигомеры при окислении, но его низкая удельная активность не зависит от окислительно-восстановительного потенциала. В присутствии глутатиона cyMDh2 и cyMDh3 защищены от димеризации и инактивации. Напротив, cyMDh4 все еще димеризуется, но больше не образует олигомеры. Из анализа одно- и двойных мутантов цистеина и структурного моделирования cyMDh4 мы пришли к выводу, что присутствие C2 и C336 допускает множественные поперечные связи в комплексах с более высокой молекулярной массой, содержащих дисульфиды внутри димера, а также между мономерами двух разных димеров.Кроме того, ядерная локализация изоформ cyMDH была значительно увеличена в окислительных условиях в изолированных протопластах Arabidopsis, в частности изоформы cyMDh4. Уникальный C2-C2-связанный димер cyMDh4, таким образом, является хорошим кандидатом в качестве окислительно-восстановительного сенсора, выполняющего функции подработки при нарушениях энергетического обмена, как было показано ранее для гликолитического фермента глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназы (GAPDH), где окислительная модификация Чувствительные каталитические остатки цистеина вызывают ядерную транслокацию.
Малатдегидрогеназы (MDH) являются важными компонентами челночных систем, обеспечивающих непрямой перенос восстанавливающих эквивалентов, полученных от NAD (H) или NADP (H), между субклеточными компартментами во всех эукариотических клетках. MDH — это широко распространенные оксидоредуктазы, катализирующие обратимое взаимное превращение малата и оксалоацетата (OAA). Эти дикарбоновые кислоты обмениваются между клеточными компартментами с помощью определенных транслокаторов и необходимы для распределения восстанавливающих эквивалентов через клеточные мембраны.Системы, состоящие из MDH и транслокаторов малата / OAA, описываются как малатные клапаны, обеспечивающие непрямой транспорт восстанавливающих эквивалентов [1,2]. Изоформы MDH встречаются в цитозоле, митохондриях, пероксисомах, а также в пластидах. И митохондрии, и хлоропласты с их электронно-транспортными цепями несут риск образования избыточных активных форм кислорода (АФК) при окислительно-восстановительном дисбалансе. Чтобы противодействовать окислительному повреждению, потоки восстанавливающих эквивалентов контролируются изоформами MDH в соответствующем компартменте для поддержания окислительно-восстановительного гомеостаза.Хотя большинство изоформ МДГ являются НАД-зависимыми, хлоропласты дополнительно обладают уникальной НАДФ-зависимой изоформой, которая посттрансляционно регулируется окислительно-восстановительными механизмами. Его N- и C-концевые удлинения, каждое из которых несет два регуляторных остатка цистеина, обратимо окисляются за счет образования дисульфидного мостика. Мы и другие ранее охарактеризовали этот редокс-регуляторный механизм, позволяющий включать активность на свету и выключать в течение нескольких секунд, когда фотосинтетический транспорт электронов прекращается при наступлении темноты [3,4].Кроме того, регулировка фактических активностей и потоков строго контролируется с помощью небольших молекул, влияющих на скорость восстановления и окисления. Например, NADP ⁺ отрицательно влияет на восстановительную активацию NADP-MDH [5-7]. Все эукариотические организмы полагаются на регулировку центрального метаболизма для контролируемого снабжения энергией, в частности, в ответ на изменение (условий окружающей среды). Эти процессы наиболее трудны и сложны у сидячих растений.
Недавно метаболические ферменты, такие как MDH, оказались в центре внимания исследований, направленных на определение конкретных целей в энергетическом метаболизме для лечения рака [8,9].Цитозольная глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназа (GAPDH), участвующая в гликолизе, а также MDH, участвует в регулировании энергоснабжения пролиферирующих раковых клеток и во время индукции аутофагии [10–12]. Строгое взаимодействие между цитозольным MDH и гликолизом, вероятно, поддерживает высокую скорость гликолиза в пролиферирующих клетках [13]. Цитозольные MDH играют важную роль в различных типах рака, таких как карцинома легких [14,15] и протоковая аденокарцинома поджелудочной железы [11]. Они участвуют в клеточно-специфической активности во время развития [16], остеокластогенеза [17] и старения [18].
Фундаментальная важность оксидоредуктаз в энергетическом метаболизме вместе с появлением различных ферментов центрального метаболизма в ядре породила активную область исследований, направленных на понимание подрабатывающих функций этих ферментов, которые претерпевают некоторые прямые посттрансляционные модификации, прежде чем они возьмут верх. новые задачи [19]. Например, ядерная транслокация GAPDH и MDH, как было показано, индуцирует транскрипцию ферментов, необходимых для преодоления кадмиевого стресса у дрожжей Candida tropicalis [20].Связанное с множественными патологическими нарушениями, нарушение клеточного окислительно-восстановительного гомеостаза в настоящее время считается центральным событием, которое должно уравновешиваться надлежащей терапией [21].
Как ранее было показано для цитозольного GAPDH, предполагается, что измененные свойства окисленных форм MDH активируют функции подработки, которые связывают энергетический метаболизм с адаптивными ответами, необходимыми для поддержания окислительно-восстановительного гомеостаза [22,23].Редокс-зависимая обратимая инактивация и ковалентная димеризация также имеют место, когда Arabidopsis cyMDh2 подвергается окислению [24,25]. Эта работа направлена на тщательное изучение окислительно-восстановительных свойств трех изоформ cyMDH из A. thaliana , чтобы предоставить доказательства сенсорной и сигнальной роли cyMDHs в ядре.
A. thaliana экотипа Columbia (Col-0) растения культивировали в течение 6 недель в камере для выращивания на почве в условиях короткого дня с 7.5 ч света и интенсивность света 150 мкЭ · м ⁻² с ⁻¹ при 20 ° C. Общую РНК выделяли из 100 мг замороженного материала листа с использованием реагента TRI (Центр молекулярных исследований, Цинциннати, США), как описано в протоколе поставщика. Из 5 мкг тотальной РНК была синтезирована кДНК с использованием олиго (dT) в качестве праймеров, поставляемых с набором, в соответствии с инструкциями поставщика (ThermoFisher Scientifc, Дармштадт, Германия; набор для синтеза первой цепи кДНК RevertAid ™).
cyMDh2, cyMDh3 и cyMDh4 амплифицировали с праймерами cyMDh2_for / cyMDh2_rev, cyMDh3_for / cyMDh3_rev и cyMDh4_for / cyMDh4_rev (дополнительная таблица S1), содержащими сайты рестрикции BamHI, NdeI, XI.После ПЦР-амплификации фрагменты cyMDH лигировали в вектор pGEM-T Easy с ограничением по липким концам в соответствии с инструкциями поставщика (pGEM®-T Easy Vector Systems, Promega). После рестрикции NdeI / BamHI (cyMDh2), NdeI / XhoI (cyMDh3) или XhoI / BamHI (cyMDh4) в соответственно ограниченный вектор экспрессии pET-16b (Novagen; Merck Chemicals, Дармштадт, Германия).
остатка цистеина cyMDh2, cyMDh3 и cyMDh4 были заменены посредством сайт-направленного мутагенеза в соответствии с инструкциями поставщика (Q5® Site Directed Mutagenesis Kit, New England Biolabs).Для ПЦР-амплификации использовали ДНК-полимеразу PfuUltra II Fusion HS (Agilent Technologies, Санта-Клара, США) и специфические праймеры для мутагенеза (дополнительная таблица S1). После ПЦР продукты обрабатывали в течение 1 ч при 37 ° C с помощью DpnI, который специфически расщепляет метилированную ДНК для удаления материнской ДНК-матрицы. Конструкции, полученные с помощью ПЦР, проверяли секвенированием ДНК через сайты лигирования.
Модель E.coli мутантный штамм BL21 (DE3) pLysS трансформировали соответствующими конструкциями. 5 мл ночной культуры использовали для инокуляции 600 мл среды YT, содержащей 100 мкг / мл ампициллина. Клетки культивировали при 37 ° C при встряхивании при 160 об / мин. После достижения OD ₆₀₀ 0,4–0,6 экспрессию белка индуцировали добавлением 1 мМ изопропил-β-D-тиогалактопиранозида. Клетки инкубировали при 15 ° C и 200 об / мин в течение следующих 12 ч и собирали центрифугированием (5000 × г , 20 мин, 4 ° C).Осадок замораживали в жидком азоте и хранили при -80 ° C. Для очистки белка клетки размораживали, ресуспендировали в промывочном буфере (50 мМ Трис-HCl, pH 7,5, 150 мМ NaCl, 5 мМ имидазол) и разрушали ультразвуком (Vibracell, Fisher Scientific, Illkirch, Франция). После центрифугирования (10000 × г , 30 мин, 4 ° C) супернатант инкубировали с Ni-Sepharose 6 Fast Flow (GE Healthcare, Мюнхен, Германия) в течение 30 мин при 4 ° C в роторном шейкере для пробирок. . После тщательной промывки N-концевой His-меченный белок элюировали элюирующим буфером (50 мМ Tris-HCl, pH 7.5, 150 мМ NaCl, 250 мМ имидазол). Для эксклюзионной хроматографии образцы восстанавливали (5 мМ DTT) и загружали в предварительно уравновешенную колонку (Merck, Дармштадт, Германия), подключенную к системе хроматографии ÄKTAprime plus (GE Healthcare). После проверки с помощью SDS-PAGE только высокочистые фракции концентрировали и хранили при -20 ° C в конечном буфере (50 мМ Трис-HCl, pH 7,5, 150 мМ NaCl; 10% (об. / Об.) Глицерин).
Индивидуальные срезы геля промывали и обрабатывали 100 мМ йодацетамида.Переваривание начинали с добавления трипсина (Promega V5511), и образцы инкубировали в течение 16 часов при 37 ° C. Затем супернатант, содержащий пептид, центрифугировали для удаления любых частиц и переносили во флаконы для ВЭЖХ. Все следующие хроматографические операции выполнялись с помощью Ultimate 3000 Nano HPLC (ThermoFisher): первые 10 мкл образцов обессоливались и концентрировались с использованием предварительной колонки (ThermoFisher, C18 PepMap 5 мкм, 100 Å с размером 300 мкм (внутренний диаметр). × длина 5 мм).Соответствующим растворителем была вода с добавлением 0,1% трифторуксусной кислоты при скорости потока 25 мкл / мин.
Загруженную и промытую предколонку переключили на «нанопоточную линию» (250 нл / мин), где была колонка Easy Spray (ThermoFisher, PepMap RSLC C18, 2 мкм 100 Å с размером 75 мкм (внутренний диаметр) и 500 мм (длина) была установлена на конце.Пептиды элюировали, заменяя буфер А (вода, 0,1% муравьиная кислота) на 80% буфера В (80% ацетонитрил, 20% вода и 0,6%).1% муравьиной кислоты) непрерывно в течение 160 мин. Ионизацию электрораспылением (ESI) проводили при 1500 В (ESI Spray Source, ThermoFisher).
Орбитальный масс-спектрометр Q-Exactive-Plus (ThermoFisher) использовали для определения данных МС, а также данных МСМС (фрагментация HCD) в условиях, описанных в дополнительной таблице S4.
Собранные данные впоследствии были загружены в Peaks Studio X (Bioinformatics Solution Inc., Канада). Пептиды были идентифицированы с использованием подхода DeNovo, а соответствующие белки — с помощью поиска в базе данных. База данных содержала отдельные пептиды трипсина соответствующей последовательности cyMDH, а также все конкатенаты цистеинсодержащих пептидов в различном расположении. Для обоих поисков (DeNovo и DB) допуск MS был отрегулирован до 15 ppm, допуск MSMS — 0,2 Да. В качестве вариабельных посттрансляционных модификаций были выбраны карбамидометилирование цистеинов (+58 Да), S-глутатионлилирование цистеинов (+305 Да) и половина дисульфидного мостика (+8 Да = +1/2 H ₂ O – 1H). .
Различные образцы cyMDH (1 мкг / мкл) предварительно восстанавливали в присутствии 0,5 мМ DTT в течение 30 мин при комнатной температуре в обменном буфере (35 мМ Tris – HCl, pH 8,8). Перед началом окислительной обработки регистрировали ферментативную активность восстановленных cyMDH. Для определения активности cyMDH белки разводили до конечной концентрации 2 нг / мкл в реакционном буфере (0,1 М трис-HCl, pH 8,0, бычий сывороточный альбумин (0.1 мг / мл), 10 мМ MgCl ₂, 0,2 мМ НАДН). Кюветы заполняли 985 мкл реакционного буфера и 5 мкл образца, содержащего 10 нг белка. После определения исходного уровня добавляли оксалоацетат субстрата (OAA) (1 мМ) и регистрировали активность cyMDH при 334 нм в течение 5 минут с использованием спектрофотометра (SPECORD 50, Analytik Jena). После определения активности полностью восстановленного фермента образцы, содержащие DTT, были обессолены (Desalting Spin Columns, Thermo Scientific). После удаления DTT белки окисляли инкубацией с 0.5 мМ диамида в течение 30 мин. Для оценки защитных свойств малых молекул при окислении cyMDH перед окислительной обработкой добавляли GSH, NAD ⁺, NADH, NADP ⁺, NADPH, OAA или малат в заданных концентрациях. После определения активности окислительно обработанных cyMDH, 20 мМ DTT использовали для проверки обратимости процесса окисления. Данные представляют собой средние значения трех независимых экспериментов с тремя техническими повторами в каждом.
Для цитозольного фермента не сразу ожидается, что остатки цистеина обратимо модифицируются путем окисления.Однако окислительная модификация cyMDh2 происходит in vitro при добавлении окислителей [24,25]. В этих исследованиях окислительные условия приводят к димеризации cyMDh2 через образование межмолекулярной дисульфидной связи между двумя мономерами. Как ковалентная димеризация, так и сопутствующая потеря активности были обращены инкубацией с восстановителем DTT и даже более эффективно в присутствии восстановленного тиоредоксина h [24,25]. Поскольку в этих исследованиях анализировался только cyMDh2, нам было любопытно сравнить все три изоформы относительно их окислительно-восстановительных свойств, и мы использовали cyMDh2 в качестве контроля.Мы обнаружили, что изоформы 1 и 2 cyMDH как инактивированы, так и ковалентно димеризуются путем окисления (Рис. 2), таким образом подтверждая предыдущие исследования cyMDh2 [24,25]. Однако наиболее интересно то, что cyMDh4 сохранял свою низкую базальную активность при окислении 0,5 мМ диамидом (рис. 2А). Кроме того, помимо ковалентной димеризации, при окислении образовывались множественные ковалентно связанные олигомеры. Их молекулярные массы соответствуют тримеру, тетрамеру, пентамеру, вплоть до нескольких субъединиц, ковалентно связанных друг с другом дисульфидными мостиками, причем все они обратимы путем повторного восстановления с помощью DTT (рис. 2B).При нативном PAGE cyMDh2 и cyMDh3 мигрируют в виде димеров, восстановленных или окисленных (дополнительный рисунок S2). Окисленные формы демонстрируют небольшой сдвиг к несколько большему размеру / заряду, вызванный конформационным изменением. Этот сдвиг не проявляется при замещении C330 серином. Напротив, белок cyMDh4 дикого типа при окислении образует более высокие агрегаты, которые отсутствуют у двойного мутанта cyMDh4 C2S C336S (дополнительный рисунок S2).
Если посмотреть на структурную модель cyMDh4 более подробно, очевидно, что уникальный остаток цистеина в положении 2 (C2), возможно, представляет собой дополнительный сайт для образования межмолекулярного дисульфидного мостика между мономерами cyMDh4 или даже делает возможным ковалентную олигомеризацию в окислительных условиях. (Рисунок 2C).C2 в cyMDh4 локализован в N-концевом удлинении белка, который показывает структуру со случайной спиралью. Даже несмотря на то, что в структурной модели C2 двух мономеров отстоят друг от друга на 46,5 Å, можно ожидать, что N-концевые области будут демонстрировать высокую гибкость. Имитация этой гибкости путем перемещения N-концевых удлинений двух мономеров cyMDh4 в структурной модели показывает, что остатки цистеина в положении 2 приближаются к величине 3,5 Å, обеспечивая образование межмолекулярного дисульфидного мостика (рис. 2C).Следовательно, мы предполагаем, что присутствие C2 в cyMDh4 может приводить к образованию ковалентно связанных димеров и / или олигомеров в окислительных условиях, которые не могут быть найдены для cyMDh2 и cyMDh3 (Figure 2B). Чтобы доказать эту гипотезу, мы дополнительно исследовали окислительно-восстановительные свойства цитозольных изоформ МДГ и их соответствующих мутантов цистеина.
Рисунок 4.
Влияние окислительно-восстановительного состояния на активность цистеиновых мутантов изоформ cyMDH.
Ферменты предварительно восстанавливали в 0,5 мМ DTT в течение 30 мин и обессоливали. Ферменты окисляли диамидом 0,5 мМ. Обратимость процесса окисления проверяли добавлением 20 мМ DTT к ферменту, обработанному диамидом. Звездочки указывают на значительные различия между окисленными и восстановленными образцами соответствующего мутанта ( P <0,01), как определено односторонним ANOVA с апостериорным тестом Тьюки (HSD) ( n = 3). (DM: двойной мутант C2S и C336S).
Рисунок 4.
Влияние окислительно-восстановительного состояния на активность цистеиновых мутантов изоформ cyMDH.
Ферменты предварительно восстанавливали в 0,5 мМ DTT в течение 30 мин и обессоливали. Ферменты окисляли диамидом 0,5 мМ. Обратимость процесса окисления проверяли добавлением 20 мМ DTT к ферменту, обработанному диамидом. Звездочки указывают на значительные различия между окисленными и восстановленными образцами соответствующего мутанта ( P <0,01), как определено односторонним ANOVA с апостериорным тестом Тьюки (HSD) ( n = 3).(DM: двойной мутант C2S и C336S).

Напротив, cyMDh4 демонстрирует иную картину, где замена C336 (соответствующего C330 в cyMDh2 и cyMDh3) на серин все еще позволяет образовывать ковалентно связанный димер, но в гораздо меньшей степени высшие олигомеры по сравнению с дикими олигомерами. белок типа и другие одиночные цистеиновые мутанты cyMDh4. Кроме того, замена C2 на серин предотвращает ковалентную олигомеризацию, но не ковалентную димеризацию cyMDh4 (рис. 3).Это означает, что ковалентно связанные олигомеры cyMDh4, по-видимому, могут образовываться только при наличии C2, но не обязательно C336. Только замена обоих, N-концевого C2 и C-концевого C336, полностью предотвратила образование каких-либо межмолекулярных дисульфидных мостиков, и в этом мутанте с двойным цистеином больше не образовывались ковалентно связанные димеры (рис. 3). Следовательно, присутствие C2 и C336 допускает множественные поперечные связи в комплексах с более высокой молекулярной массой, включающих поперечные связи внутри димера, а также между мономерами двух разных димеров, и экспериментально подтверждает нашу здесь описанную гипотезу (см. Выше), которая была только на основе структурной модели cyMDh4 до сих пор (рис. 2C).
Что касается активности, мутант C330S cyMDh2 и cyMDh3 потерял свою чувствительность к диамиду и сохранял почти полную активность независимо от восстановительной или окислительной преинкубации. Не было обнаружено значительного эффекта окисления, когда цистеиновые мутанты cyMDh4 подвергались действию диамида, подобного дикому типу (рис. 4). Однако замена C2 на серин привела к сильному ингибированию окисления и к повышенной активности восстановленного cyMDh4, который аналогичен дикому типу cyMDh2 и cyMDh3 (фиг. 4).Удаление цистеина на уникальном удлинении N-концевой последовательности cyMDh4 восстановило свойства, общие для cyMDh2 и cyMDh3, а именно более высокую специфическую активность и окислительно-восстановительную зависимость.
Структурное выравнивание cyMDh2, cyMDh3, cyMDh4 и cyMDh4 C2S выявило структурные различия, близкие к N-концевой области белков (рис. 5A). cyMDh2 и cyMDh3 (показаны темно-серым и серым соответственно) характеризуются небольшой α-спиральной вторичной структурой, в то время как cyMDh4 (показано фиолетовым цветом), по прогнозам, сворачивается в случайные спирали в этой области.Замена C2 на серин в cyMDh4 (показано синим) приводит к образованию небольшой α-спирали (рис. 5A). Кроме того, распределение заряда вокруг сайта связывания для NAD ⁺ cyMDh2, cyMDh3, cyMDh4 и cyMDh4 C2S отличается. В то время как сайт связывания для NAD ⁺ является строго положительным в cyMDh2 и cyMDh3, этот сайт связывания менее положительный или даже частично нейтральный в cyMDh4 (рис. 5B). Замена C2 на серин в cyMDh4 также напоминает сильно положительные заряды, окружающие сайт связывания NAD ⁺ (Рисунок 5B).Хотя N-концевая область cyMDh4 расположена напротив сайта связывания NAD ⁺ (на задней стороне), присутствие C2, по-видимому, оказывает влияние на эту область на большом расстоянии. Однако различия в заряде вокруг сайта связывания NAD ⁺ и наличие или отсутствие небольшой α-спирали в N-концевой области cyMDH могут влиять на сродство к NAD ⁺ и, следовательно, могут , приводят к наблюдаемой низкой активности белка дикого типа cyMDh4.Этот эффект мог бы объяснить, почему замена C2 на серин приводит к аналогичному уровню активности cyMDh4, который наблюдается для белков дикого типа cyMDh2 и cyMDh3 в восстанавливающих условиях и инактивации при окислении.
Поскольку in vivo , любой фермент подвергается воздействию различных концентраций его субстратов, продуктов и GSH, мы проанализировали окислительно-восстановительные свойства трех изоформ cyMDH в присутствии субстратов NAD ⁺, NADH, OAA и малат, а также с GSH или без него.Как ковалентную олигомеризацию, так и активность измеряли после предварительной инкубации с окислителем в присутствии и в отсутствие этих небольших молекул или их комбинаций. Интересно, что в отсутствие GSH метаболиты также служат защитными небольшими молекулами, которые предотвращают окисление и ковалентную димеризацию изоформ cyMDH. Из протестированных субстратов и продуктов реакции MDH и NADP (H) в качестве возможного индикатора приближающегося окислительного стресса, только NADH, по-видимому, защищает cyMDh2 и cyMDh3 от ковалентной димеризации, а cyMDh4 — от ковалентной олигомеризации, в то время как ковалентная димеризация этой третьей изоформы протекает. все еще возможно (рис. 9А).Однако защита с помощью NADPH была менее эффективной по сравнению с NADH. Поскольку GSH обладает таким же защитным эффектом, как и NADH, мы сравнили оба эффекта, а также применили обе защиты малых молекул одновременно (рис. 9B). Защита от ковалентной димеризации с помощью NADH и GSH, применяемых отдельно или вместе, была очевидна для всех изоформ cyMDh2 и cyMDh3 дикого типа и мутанта cyMDh4 по C2S. Однако как cyMDh4 дикого типа, так и его мутант C336S все еще ковалентно димеризованы в присутствии NADH и GSH.По-видимому, C2, который присутствует в N-концевом удлинении cyMDh4, по-видимому, способен подвергаться C2 – C2-связанной димеризации даже при относительно умеренном стрессе, поскольку NADH и GSH, по-видимому, не защищают и не предотвращают образование этой конкретной поперечной связи .
Сравнительный анализ индуцированных диамидом окислительных модификаций цистеина, в частности образования межмолекулярных дисульфидных мостиков, выявил различия между тремя цитозольными изоформами НАД-зависимого МДГ из A.Талиана . Окисление cyMDh2 и cyMDh3 приводит к инактивации, как сообщалось ранее для cyMDh2 [24,25]. В отличие от этого, cyMDh4 существенно не инактивируется в окислительных условиях. Одновременно добавленный GSH, присутствующий в клеточной среде, защищает cyMDh2 и cyMDh3 от ковалентно связанной димеризации и инактивации, но cyMDh4 с N-концевым удлинением, несущим уникальный остаток цистеина в положении 2 (C2), ковалентно димеризуется независимо от присутствия защитных средств.
В дополнение к GSH, NADH предотвращал ковалентную димеризацию cyMDh2 и cyMDh3 и образование ковалентно связанных высших олигомеров для cyMDh4. Было обнаружено, что все изоформы cyMDH подвергаются ядерной транслокации при добавлении диамида к изолированным протопластам мезофилла из Arabidopsis, в частности cyMDh4. Поскольку GSH присутствует в клеточной среде в относительно высоких количествах, обработка диамидом изолированных протопластов мезофилла приведет к S-глутатионилированию изоформ cyMDH, тем самым предотвращая ковалентную олигомеризацию и в то же время делая возможным ядерную транслокацию.Эти результаты вместе с наблюдаемой нечувствительностью к окислительно-восстановлению и низкой активностью подтверждают вывод о том, что cyMDh4 функционирует как высокочувствительный окислительно-восстановительный датчик. В будущей работе будет важно проанализировать транскрипционные ответы, индуцированные cyMDh4, перемещенным в ядро. Поскольку cyMDh2 и cyMDh3 также перемещаются в ядро в окислительных условиях, все cyMDH являются кандидатами на интеграцию окислительно-восстановительной и метаболической информации и экспрессии генов.
Окисление цитозольных ферментов было обнаружено в других случаях, например.г. для цитозольного НАД-зависимого GAPDH (GapC1 и GapC2 у растений) [23,37]. Этот гликолитический фермент обеспечивает НАДН в сочетании с АТФ из сильно связанной предыдущей стадии 3-фосфоглицераткиназы (3-PGK). Любой предстоящий окислительный стресс инициирует окислительные модификации в определенных остатках цистеина GAPDH. Окислительная модификация каталитического цистеина и соседнего остатка цистеина немедленно приводит к инактивации гликолитического GAPDH, и проявляются различные подрабатывающие функции GAPDH, в том числе его ядерная транслокация [23].Гликолитический GAPDH защищен от окисления, пока присутствует субстрат глицеральдегид-3-фосфат (GAP) [37], что позволяет интегрировать метаболическое состояние и окислительно-восстановительное состояние. Ингибирование гликолиза перенаправляет окисление глюкозы на путь окислительного пентозофосфата (OPP), генерирующий NADPH для защиты от окислительного стресса [38]. Этот пример хорошо известен, хотя множественные посттрансляционные модификации, такие как S-глутатионилирование, S-нитрозилирование или ацетилирование лизина, которые, как было обнаружено, происходят в GAPDH растений, дрожжей и животных, еще не могут быть реализованы. полностью связано с его многочисленными подрабатывающими функциями [39,40].
Различные другие цитозольные ферменты центрального метаболизма, такие как триозофосфат-изомераза [41], изоцитратдегидрогеназа [42] и комплексы 2-оксокислоты дегидрогеназы [43], также подвержены окислительно-восстановительной регуляции и, как считается, обнаруживают окислительно-восстановительный дисбаланс, переключение в их подрабатывающие функции. Описанные здесь ответы cyMDH представляют собой другой пример этого принципа строгого контроля потоков энергии с помощью метаболического фермента, функционирующего как тиоловый переключатель, регулируемый метаболитами.
В растущих тканях ассимиляционные процессы и центральный метаболизм имеют первостепенное значение для увеличения биомассы и обеспечения энергией для клеточных функций. Из-за компартментализации и того факта, что мембраны в некоторой степени непроницаемы для АТФ и практически отсутствуют переносчики для восстанавливающих эквивалентов, таких как НАД (P) (H), распределение энергетических эквивалентов зависит от косвенных механизмов с использованием взаимопревращаемых метаболитов, таких как триозофосфат. и малат.Последняя челночная система, так называемый малатный клапан [1,2], состоит из транспортеров дикарбоксилата и компартмент-специфичных ферментов, превращающих малат [44,45]. Хлоропласт снабжен двумя изоформами MDH. С одной стороны, он оснащен активируемым светом НАДФ-МДГ, экспортирующим избыточные восстанавливающие эквиваленты на свет, так что НАДФ ⁺ остается доступным в качестве акцептора электронов, даже когда НАДФН не расходуется внутри хлоропласта или для стабилизации НАДФН Соотношение АТФ. С другой стороны, NAD-зависимый MDH регенерирует NAD ⁺ для продолжения пластидного гликолиза, который необходим для доставки АТФ путем фосфорилирования субстрата в нефотосинтетических ситуациях.В обоих случаях малат экспортируется в цитозоль и может быть преобразован в OAA с помощью cyMDH. Образующиеся в результате восстанавливающие эквиваленты (НАДН) могут либо способствовать ассимиляции нитрата в цитозоле и митохондриальному транспорту электронов для синтеза АТФ, либо рассеиваться без синтеза АТФ через внешние НАД (Ф) Н дегидрогеназы и альтернативные оксидазы (АО), если АТФ уже находится в избытке. Такое окончательное окисление, связанное только с рассеиванием тепла, является универсальным средством минимизации избыточного восстановления или окислительного стресса у растений в стрессовых условиях [46,47].
В присутствии GSH активности cyMDh2 и cyMDh3 защищены от инактивации при окислении S-глутатионилированием по C330. Напротив, cyMDh4 подвергается ковалентной димеризации посредством дисульфидной связи C2-C2, но не олигомеров в присутствии глутатиона. Образование уникального C2 – C2-связанного дисульфидом cyMDh4 затем может служить в качестве окислительно-восстановительного сенсора для индукции защитных путей. Напротив, защита НАДН, вероятно, основана на стерических эффектах.Однако даже в присутствии НАДН ковалентная димеризация cyMDh4 будет происходить при окислении. Описанное здесь окисление cyMDh2 и cyMDh3 в отсутствие GSH и NADH будет происходить только тогда, когда окислительно-восстановительный гомеостаз малатного клапана и превращение в NADH сильно нарушены, а NADH снижается. Из-за инактивации cyMDh2 и cyMDh3 для поддержания окислительно-восстановительного гомеостаза необходимы пути, ведущие к генерации НАДФН. В этих экстремальных условиях перенаправление окисления малата привело бы к образованию НАДФН и пирувата (и СО ₂), катализируемого НАДФ-зависимыми яблочными ферментами (НАДФ-МЭ) в цитозоле [44,48].Затем НАДФН используется для улавливания АФК, а образовавшийся CO ₂ может повторно ассимилироваться в цикле Кальвина-Бенсона. Затем генерируемый светом АТФ и его восстанавливающие эквиваленты могут быть использованы для ассимиляции CO ₂, и риск чрезмерного восстановления в стрессовых ситуациях предотвращается. Малатный челнок из хлоропластов в митохондрии служит для предотвращения накопления АФК и оптимизации фотосинтеза у Arabidopsis [49] или для индукции гибели клеток [50], которые являются примерами межорганеллярной коммуникации, где малат и MDH выполняют важные функции распределения энергии и защиты ROS. .У риса было обнаружено отрицательное влияние на образование крахмальных зерен и развитие семян у мутанта FLO16, лишенного цитозольного MDH [51].
Уникальное поведение cyMDh4 позволяет ему функционировать в качестве сенсора, который очень рано реагирует на предстоящий окислительный стресс, когда клеточный окислительно-восстановительный гомеостаз все еще сохраняется, а окислительно-восстановительные состояния GSH (и NADH) практически не затрагиваются. Основная функция этой изоформы вряд ли связана с ее ферментативной активностью, которая невысока и не зависит от окислительно-восстановительного потенциала, а скорее с ее способностью брать на себя функции подработки.Поскольку его C2 – C2-связанный дисульфидно-связанный димер появляется уже при незначительном дисбалансе, он является вероятным кандидатом для задач в другом месте клетки, например. как регулятор транскрипции. cyMDh2 и cyMDh3 защищены от инактивации и ковалентной димеризации NADH, а также GSH. CyMDh4, напротив, по-прежнему будет образовывать уникальные C2-C2-связанные димеры, как только возникает окислительный стресс, даже когда окислительно-восстановительное состояние цитозоля поддерживается в восстановленном состоянии, а окислительно-восстановительные состояния GSH (и NADH) не поддерживаются. или мало пострадали.Клеточная активность, требующая изменения транскрипционной активности, чтобы справиться с предстоящим вызовом, может быть вызвана своевременно и надлежащим образом до того, как станет очевидным серьезный дисбаланс или даже повреждение.
В клетках млекопитающих цитозольный MDH взаимодействует с p53, фактором транскрипции, подавляющим опухоль, в ядре и влияет на транскрипционную активность во время метаболического стресса [52]. Этот пример MDH как подрабатывающего фермента центрального метаболизма напоминает хорошо известную ситуацию для GAPDH, когда метаболизм напрямую регулирует транскрипцию и судьбу клеток в целом [53,54].p53, однако, также участвует в перенаправлении метаболических потоков, когда гликолиз включен в раковых клетках и путь OPP инактивирован, а GAPDH является центральным сенсором дисбаланса, который берет на себя коактиваторную активность транскрипции [55-58]. Прямое влияние p53 на экспрессию яблочных ферментов, таким образом, подавление продукции НАДФН и индукция старения, было также показано для клеток млекопитающих [59], что является еще одним примером двойной роли метаболических ферментов как в преобразовании энергии, так и в передаче сигналов. деятельность.Было показано, что как в клетках HeLa, так и в клетках A. thaliana малат и, в данном случае, митохондриальный MDH ответственны за индукцию запрограммированной гибели клеток [50]. Взаимодействие MDH млекопитающих с p53 может указывать на аналогию с взаимодействием растительного MDH с растительным гомологом p53, а именно SOG1 (супрессор гамма-ответа 1), фактором транскрипции, участвующим в стрессовой реакции при воздействии ультрафиолета [60], хотя пока нет экспериментальных данных.
Различные типы и уровни стресса могут ощущаться из-за различных, но специфических модификаций ферментов, участвующих в энергетическом обмене.Корреляция различных посттрансляционных модификаций и их комбинаций со специфическим клеточным стрессом приведет к более детальной картине стрессовых реакций. Продвинутая протеомика, нацеленная на одновременный анализ широкого спектра ковалентных модификаций, должна применяться с высоким временным и пространственным разрешением после воздействия стресса. Первым шагом является окислительно-восстановительный комплекс цистеина, предложенный для многопараметрического анализа клеточных окислительно-восстановительных сетей с возможным клиническим применением для идентификации ранних маркеров дисбаланса [61].Белок, который подвергается множественным модификациям цистеина (а также ацетилированию лизина и др.), Затем будет функционировать как встроенный датчик и посредник для контроля энергетического метаболизма и поддержания окислительно-восстановительного гомеостаза в широком диапазоне сложных ситуаций. Редокс-тиоловые переключатели были предложены для тонкой настройки центральных путей энергетического метаболизма [62], при этом S-сульфгидратация является еще одним промежуточным этапом во время метаболического перепрограммирования, когда необходимо интегрировать несколько факторов стресса [63].
Поскольку окислительно-восстановительное состояние клетки не только отражается в модификациях цистеина, но даже более непосредственно через окислительно-восстановительные пары NAD ⁺ / NADH и NADP ⁺ / NADPH, напрямую связанные с активностью оксидоредуктаз, как окислительной, так и восстановительной. стресс ощущается на метаболическом уровне и передается в цепь передачи сигнала [64]. Действуя как небольшие молекулы, влияя на модификации белков непосредственно ферментами, потребляющими NAD ⁺ [21], или опосредованно за счет их воздействия на сайты модификации на ферментах [7] или на факторах транскрипции [65], эти коферменты могут точно настраивать потоки энергии по мере необходимости [5].
В совокупности цитозоль со своими метаболическими ферментами связывает потоки энергии между различными клеточными компартментами и может рассматриваться как центр окислительно-восстановительной передачи сигналов, интегрирующий различные сигналы и обеспечивающий ступенчатые и направленные ответы в стрессовых ситуациях [66]. В клетках дрожжей и млекопитающих, которые потребляют глюкозу либо для роста, либо для контролируемой пролиферации, защиты от стресса при патологических условиях или неконтролируемого роста опухолей, изменение маршрута метаболизма находится под строгим контролем [38,67].В раковых клетках энергетический метаболизм перепрограммируется на аэробный гликолиз (также известный как эффект Варбурга) из-за дефектов подавляющего опухоль фактора транскрипции p53 [68–72], что снова указывает на связь между энергетическим метаболизмом и главным регулятором транскрипции p53.
В физиологическом контексте в присутствии восстановленного глутатиона изоформы cyMDh2 и cyMDh3 защищены от димеризации и инактивации, в то время как cyMDh4 уникален тем, что образует димер, но не через C-концевые остатки цистеина.Вместо этого перекрестное сшивание происходит исключительно через цистеин C2, который, по-видимому, также отвечает за более низкую активность cyMDh4 и его нечувствительность к окислению. Вместе с наличием cyMDh4 в ядре, наблюдаемым в изолированных протопластах мезофилла, экспрессирующих флуоресцентные слитые белки cyMDh4, эти свойства действительно могут указывать на новую функцию этой минорной изоформы в регуляции транскрипции, поскольку ее относительная встречаемость значительно увеличилась в ядре после лечение диамидом.

Как заменить лампочку ходовых огней на Лада Гранта

Стоит ли менять исправную лампу ходовых огней?

Обзор стандартной лампы ДХО

Процесс замены ламп ДХО

Недостатки светодиодных ламп

Требования к установке

Советы

Лампы ДХО Лада Гранта: замена, какие лучше

О лампах с повышенным визуальным комфортом

Если требуется замена ламп, то ее осуществляют следующим простым методом.

Диодные ходовые огни

Особенности монтажа светодиодных ДХО

Как поменять лампу дхо на гранте

О лампах с повышенным визуальным комфортом

Если требуется замена ламп, то ее осуществляют следующим простым методом.

Диодные ходовые огни

Особенности монтажа светодиодных ДХО

Замена дхо на гранте

Дхо лада гранта замена

Замена ламп ДХО Лада Гранта: как все сделать правильно

Лампы повышенного визуального комфорта

Дневные ходовые огни на основе диодов

Нюансы установки светодиодных ламп ДХО

Page 2

Лада-Гранта, замена штатных ламп ДХО на светодиодные. — DRIVE2

Page 2

Замена ламп ДХО/Габариты на Led — Лада Гранта Лифтбек, 1.

замена заводских ДХО на светодиодные( временная) — Лада Гранта Лифтбек, 1.6 л., 2016 года на DRIVE2

Page 2

Лампа ДХО Лада Гранта: замена и характеристики

Лампы повышенного визуального комфорта

Дневные ходовые огни на основе диодов

Нюансы установки светодиодных ламп ДХО

Лампа ходового огня | Лады Гранты

Государственная субсидия на хороший ремонт — 5337

Правомочные получатели

Допустимые мероприятия

Нормативные ссылки

Доступность финансирования

Распределение финансирования

Матч

Почему моя гитара звучит фальшиво? Это манекен интонации!

Почему моя гитара звучит фальшиво?

Новые струны помогают гармонировать с звучанием гитары

Регулировка анкерного стержня и бриджа для идеального звучания гитары

Произошла ошибка при настройке пользовательского файла cookie

Настройка вашего браузера для приема файлов cookie

Почему этому сайту требуются файлы cookie?

Что сохраняется в файле cookie?

Страница не найдена | MIT

JCB_201407071 1..13

Три цитозольные изоформы НАД-малатдегидрогеназы Arabidopsis thaliana: на перекрестке между потоками энергии и редокс-сигнализацией | Биохимический журнал

Автор: alexxlab

Добавить комментарий Отменить ответ

Рубрики